[发明专利]一种高通量单细胞测序文库构建方法在审
| 申请号： | 201810796145.5 | 申请日： | 2018-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN108949745A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 孙诚;郭利;赵玉琳;张建东;张连军;宋克清;吴小彦 | 申请（专利权）人： | 天津迈基生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300450 天津市滨海新区天津经济技术开*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高通量单细胞测序文库构建方法，包括以下步骤，S1，将来自所述单细胞的核酸接触第一物质和包含链置换活性的聚合酶，接触发生于4℃至约25℃温度范围的条件下，引物与所述核酸退火，且所述引物通过酶切得到延伸，将所述混合物置于使全扩增子的两个末端能够彼此退火的条件下，从而使得全扩增子不能与第一物质或第二物质退火，其中第二物质富含30％‑40％的G或C；以及使第一物质或第二物质与混合物中剩余的线性产生的半扩增子退火并延伸，其中所述退火和延伸在核酸不会进一步解链的情况下发生，由此产生线性产生的全扩增子A。本发明设计巧妙，方法合理，高通量测序文库，效果好，准确性高，适合推广。 | ||
| 搜索关键词： | 退火 扩增子 测序文库 高通量 核酸 混合物 构建 引物 延伸 链置换活性 聚合酶 富含 解链 酶切 | ||
【主权项】：
1.一种高通量单细胞测序文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤，S1，将来自所述单细胞的核酸接触第一物质和包含链置换活性的聚合酶，接触发生于4℃至约25℃温度范围的条件下，引物与所述核酸退火，且所述引物通过酶切得到延伸，其中所述第一物质包括富含30％‑40％的G或富含30％‑40％的C；和包含限制性内切核酸酶位点，从而产生包含引物退火的核酸模板的混合物；对引物退火的核酸模板进行两轮或更多轮延伸、解链和退火步骤，由此产生核酸模板、线性产生的半扩增子和非线性产生的全扩增子的混合物；将所述混合物置于使全扩增子的两个末端能够彼此退火的条件下，从而产生成环的全扩增子；将所述成环的全扩增子接触限制性内切核酸酶，从而使得全扩增子不能与第一物质或第二物质退火，其中第二物质富含30％‑40％的G或C；以及使第一物质或第二物质与混合物中剩余的线性产生的半扩增子退火并延伸，其中所述退火和延伸在核酸不会进一步解链的情况下发生，由此产生线性产生的全扩增子A；S2，所述S1中的全扩增子A用作测序文库。
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