[发明专利]一种靶向EGFR vⅢ的CAR-T细胞的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201810801441.X | 申请日： | 2018-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN108913718A | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 刘希;尚小云 | 申请（专利权）人： | 苏州茂行生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 张黎 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市苏州工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种靶向EGFRvⅢ且经基因修饰的CAR‑T细胞的制备方法及应用，包括将靶向EGFRvⅢ的氨基酸序列密码子进行优化，使之更适合在人源宿主体内表达，制备CAR‑T细胞；以及利用单碱基编辑的方法敲除CAR‑T细胞上的PD‑1基因；或组合分泌白细胞介素12(IL‑12)，用于促进活化的T细胞增殖；或组合分泌anti‑PD1抗体，用于结合其他T细胞上的PD1，解除肿瘤组织对T细胞的抑制作用。本发明选用PiggyBac转座子系统提高了转染效率和导入基因的表达效率，并缩短操作时间，简化CAR‑T的制备程序，另外本发明敲除PD‑1基因时避免了使用病毒载体，安全性更高。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 靶向 敲除 分泌 宿主 氨基酸序列 白细胞介素 表达效率 病毒载体 导入基因 基因修饰 体内表达 肿瘤组织 转染效率 基因 单碱基 密码子 活化 抗体 人源 应用 细胞 优化 | ||
【主权项】：
1.一种制备靶向EGFRvⅢ的CAR‑T细胞的方法，包括以下步骤：(1)准备PBMC细胞、含EGFRvⅢ基因ScFV序列的质粒，将含EGFRvⅢ基因ScFV序列的质粒以及与EGFRvⅢ配合使用的转座酶质粒共转染PBMC细胞后，得到转染后的PBMC细胞，该转染后的PBMC细胞的基因组上整合了EGFRvⅢ基因ScFV序列；(2)采用CD3抗体作为T细胞活化剂并培养扩增转染后PBMC细胞，获得靶向EGFRvⅢ的CAR‑T细胞，该CAR‑T细胞的基因组上整合了EGFRvⅢ基因ScFV序列。
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