[发明专利]一种糖基亲水磁性复合物微球的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种糖基亲水磁性复合物微球的制备方法及其应用，可有效解决糖蛋白分离富集效率低、种类少、操作繁琐、选择性与富集容量较低的问题，技术方案是首先采用溶剂热合成制备纳米四氧化三铁为磁性核心；然后对磁球表面进行双键功能化，使其表面修饰活性双键基团；再以氨基葡萄糖与丙烯酰氯为原料制备双键修饰葡萄糖，以其作为后续聚合反应的功能单体；最后采用蒸馏沉淀聚合反应，以双键修饰葡萄糖为单体，于磁球表面形成糖基亲水复合物；本发明制备方法简单，成本较低，节能环保，反应条件温和，易于生产，能够高效高选择性的分离富集糖蛋白/糖肽，并可以应用于复杂生物样品中糖肽或糖蛋白的富集，经济和社会价值显著。

主权项

1.一种糖基亲水磁性复合物微球的制备方法，其特征在于，首先采用溶剂热合成制备纳米四氧化三铁为磁性核心；然后对磁球表面进行双键功能化，使其表面修饰活性双键基团；再以氨基葡萄糖与丙烯酰氯为原料制备双键修饰葡萄糖，作为后续聚合反应的功能单体；最后采用蒸馏沉淀聚合反应，以双键修饰葡萄糖为单体，于磁球表面形成糖基亲水复合物；具体包括以下步骤：（1）溶剂热法合成四氧化三铁磁性纳米微球：取2.0‑3.0g六水合三氯化铁溶解于70‑140ml乙二醇，超声5‑30min，得到黄色透明状液体，再加入7.0‑8.0g乙酸铵与0.6‑1.0g柠檬酸三钠，室温下机械搅拌1‑3h，将所得均匀溶液置于150‑190℃油浴中搅拌1‑2h，加热至160‑200℃，反应12‑24h，冷却至室温得磁性微球，依次用无水乙醇和水各清洗1‑3次，于40‑60℃下干燥10‑14h，得四氧化三铁磁性纳米微球；（2）磁性纳米微球表面双键修饰：取0.4‑1.0g四氧化三铁磁性纳米微球分散于50‑80ml乙醇、10‑16ml水的混合溶液中，超声分散均匀，机械搅拌下，逐滴加入0.8‑1.5ml甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷和1.5‑2.0ml浓氨水，于40‑80℃下反应20‑30h，所得产物用无水乙醇清洗，于40‑60℃下干燥10‑14h，得到双键修饰磁性纳米微球；（3）氨基葡萄糖的双键修饰：取0.5‑1.0 mL丙烯酰氯和0.5‑1.0 mL质量浓度为0.1M的硫酸混合，磁力搅拌反应3‑6 h，得反应液A；另取1.0‑1.5g 氢氧化钠，加入20‑30mL甲醇超声溶解，再加入2.0‑3.0g氨基葡萄糖超声溶解，最后加入0.2‑0.3g氰基硼氢化钠超声溶解，磁力搅拌3‑6h，得反应液B，将反应液A、B混合，氮气保护，室温磁力搅拌反应3‑6h，真空减压抽滤，甲醇洗涤3次，真空干燥即得双键修饰葡萄糖；（4）亲水复合物制备：取40‑60mg步骤（2）制备的双键修饰磁性纳米微球，加入30‑60mL乙腈‑水混合液，其中水的体积百分比为2‑20%，超声分散均匀；然后加入100‑300 mg 步骤（3）制备的双键修饰葡萄糖、25‑75 mg N，N‑亚甲基双丙烯酰胺和2‑7 mg 偶氮二异丁腈，超声分散后在油浴中加热，15‑30min由室温至沸腾，蒸馏出15‑30ml溶液停止反应，回收材料，依次用乙醇和水各洗涤3次，55‑65℃下干燥10‑15h，即得糖基亲水磁性复合物微球。