[发明专利]一种永生化人源神经干细胞系及其制备方法在审
| 申请号： | 201810804437.9 | 申请日： | 2018-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN108866005A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 陈陆馗;张桂龙 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种永生化人源神经干细胞系及其制备方法，该方法包括如下步骤：(1)分离培养原代人海马来源神经干细胞；(2)构建含L‑myc基因的重组慢病毒载体；(3)对上述重组慢病毒进行包装生产及上清液收集；(4)选取合适浓度病毒上清液对干细胞进行转染筛选及构建永生化人源神经干细胞系。本发明永生化细胞系的制备方法是一种新的稳定且安全有效的永生化编码策略；制备的永生化人源神经干细胞系具有原代神经干细胞的所有生物学特征，同时也具有正常的三系分化特性，可以成功分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞，同时该细胞系的生长速度及成神经球的能力较原代细胞强，成功传代20代以后依然可以快速增殖，并且无致瘤性。 | ||
| 搜索关键词： | 永生化 神经干细胞系 人源 制备 神经干细胞 构建 神经元 重组慢病毒载体 少突胶质细胞 星形胶质细胞 传代 上清液收集 生物学特征 重组慢病毒 分化 包装生产 编码策略 分离培养 快速增殖 浓度病毒 原代细胞 海马 干细胞 上清液 神经球 致瘤性 三系 转染 筛选 成功 生长 安全 | ||
【主权项】：
1.一种永生化人源神经干细胞系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)分离培养原代人海马来源神经干细胞；(2)构建含L‑myc基因的重组慢病毒载体pLenti‑EF1a‑EGFP‑P2A‑Puro‑CMV‑MYCL‑3Flag；(3)对重组慢病毒进行包装生产及上清液收集；(4)采用慢病毒上清液对干细胞进行转染筛选及构建永生化人源神经干细胞系。
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