[发明专利]一种绵羊羔羊瘤胃上皮细胞培养方法在审
| 申请号： | 201810811345.3 | 申请日： | 2018-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN109097320A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 刘军花;刘理想;毛胜勇;朱伟云;孙大明 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 210095 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种绵羊羔羊瘤胃上皮细胞培养方法，包括如下步骤：获取羔羊瘤胃组织；钝性分离黏附的浆膜层和肌肉层；将瘤胃组织裁剪，用胰蛋白酶溶液消化，直至瘤胃上皮组织呈现粘性且乳头发白；用胰蛋白酶继续消化，收集细胞；把收集到的细胞沉淀清洗，用完全培养基重悬细胞后，接种于培养瓶中培养；换瓶培养，定期更换培养基，完成铺层，即培养所得的细胞为瘤胃上皮细胞。本发明对瘤胃上皮细胞分离培养进行改进，通过此法能有效获得活力高，贴壁早，生长快的瘤胃上皮细胞。普通消化分离方法所得的细胞接种后3～6d开始贴壁，8～10d完成铺层，而本发明的消化分离方法所得的细胞在2～3d开始贴壁，5～6d完成铺层。 | ||
| 搜索关键词： | 瘤胃 上皮细胞 铺层 贴壁 细胞 消化 上皮细胞培养 绵羊羔羊 胰蛋白酶 胰蛋白酶溶液 完全培养基 定期更换 钝性分离 分离培养 上皮组织 细胞沉淀 细胞接种 培养基 乳头 肌肉层 浆膜层 培养瓶 裁剪 发白 羔羊 换瓶 重悬 黏附 接种 清洗 生长 改进 | ||
【主权项】：
1.一种绵羊羔羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)获取羔羊瘤胃后腹盲囊靠近后沟处组织，将瘤胃内容物冲洗干净；(2)钝性分离并清洗瘤胃组织；(3)将瘤胃组织裁剪，用胰蛋白酶溶液消化，直至瘤胃上皮组织呈现粘性且乳头发白，进行清洗；(4)清洗后用胰蛋白酶继续消化，每隔一段时间收集一次细胞悬液，将细胞悬液过滤后混合，离心收集细胞；(5)收集到的细胞沉淀清洗，完全培养基重悬细胞后，接种于培养瓶中培养；(6)换瓶培养以去除成纤维细胞；定期更换培养基，完成铺层，即培养所得的细胞为瘤胃上皮细胞。
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