[发明专利]人副流感I型病毒大规模培养的方法在审
申请号: | 201810818654.3 | 申请日: | 2018-07-24 |
公开(公告)号: | CN108893451A | 公开(公告)日: | 2018-11-27 |
发明(设计)人: | 周伟伟;周雷鸣;孙静静;赵巧辉;李桂林;付光宇;吴学炜 | 申请(专利权)人: | 郑州伊美诺生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00 |
代理公司: | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人: | 王霞 |
地址: | 450016 河南省郑州市*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | 本发明公开了一种人副流感I型病毒大规模培养的方法,首先将人副流感I型病毒按0.001~0.01MOI接种于长满单层的Vero细胞上,然后于37℃、5%CO2培养;每天采用ELISA法检测上清中病毒效价,绘制病毒增殖曲线;至第7天,收取病毒培养上清,使用胰酶消化液消化细胞,按1:4‑5进行带毒细胞的传代扩增,然后于37℃、5%CO2培养;重复收取病毒液,重新添加病毒培养液,或重复进行带毒细胞的传代扩增至所需规模。本发明在第7天进行带毒细胞的传代扩增,此时病毒效价高,细胞活率较好,减少了细胞制备量,缩短了培养时间,提高了工作效率;同时本发明按1:4‑5进行带毒细胞的传代扩增,无需重新接毒,可根据需要扩大规模,满足了对人副流感I型病毒疫苗进行深入研究和制造的需求。 | ||
搜索关键词: | 传代 细胞 流感 扩增 大规模培养 病毒效价 病毒 病毒培养液 胰酶消化液 病毒培养 病毒疫苗 病毒增殖 工作效率 细胞制备 病毒液 重复 单层 接种 绘制 消化 检测 制造 研究 | ||
【主权项】:
1.一种人副流感I型病毒大规模培养的方法,其特征在于:包括下述步骤:第一步,将人副流感I型病毒按0.001~0.01MOI接种于长满单层的Vero细胞上,然后于37℃、5%CO2培养;第二步,接种后,每天采用ELISA法检测上清中病毒效价,绘制病毒增殖曲线;第三步,培养至第7天,收取病毒培养上清,使用胰酶消化液消化细胞,按1:4‑5进行带毒细胞的传代扩增,然后于37℃、5%CO2培养;第四步,重复第二步收取病毒液,重新添加病毒培养液,或重复第三步进行带毒细胞的传代扩增至所需规模。
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