[发明专利]一种杂交瘤细胞染色体的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种杂交瘤细胞染色体的鉴定方法，将处于指数生长期的待测杂交瘤细胞中加入秋水仙素处理，收集细胞再加入低渗液处理，用甲醇:冰乙酸=3:1之比例配制的固定液进行一次预固定和两次固定，滴片及Giemsa染色后观察，放大、拍照、计数。本发明的优点在于通过各参数及制作染色体玻片关键步骤及条件的限定，得到的染色体玻片图片清晰，分散性好，可以清晰的观察到细胞染色体的数目及形态特征，通过对染色体数目及形态特征的分析，来判断杂交瘤细胞遗传的稳定性，利于通过染色体核型分析技术来进一步对杂交瘤细胞的遗传稳定性进行研究。

主权项

1.一种杂交瘤细胞染色体的鉴定方法，其特征在于：包括下述步骤：第一步，将处于指数生长期的待测杂交瘤细胞中加入秋水仙素，调整秋水仙素的最终浓度为0.05μg/ml，37℃、5% CO2培养箱中培养4小时，使细胞分裂停止在中期相；第二步，将第一步培养的细胞离心后，去上清液，留细胞沉淀物；第三步，将第二步得到的细胞沉淀物中加入经37℃预温的0.075M/L KCl低渗液，使细胞悬浮于低渗液中，置37℃水浴中处理20min；第四步，按甲醇:冰乙酸=3:1之比例配制固定液，将该固定液1mL加入第三步得到的细胞悬液中，打匀后离心，去上清液；第五步，将第四步中的细胞沉淀物中加入5mL上述固定液，轻轻打匀，在室温下静置15min，离心后去上清液；重复该步骤两次；第六步，将第五步固定处理后的细胞用固定液打匀成细胞悬浮液，按每片2~3滴滴加到已在75%酒精4℃预冷2小时的载玻片上，滴液高度30cm，火焰固定；第七步，取1份Giemsa原液加入9份pH7.4磷酸缓冲液进行稀释，对第五步制备的载玻片染色20min，用水冲洗后自然干燥，得到标本片；第八步，将第七步制备好的标本片放在物镜下，显微镜观察，找到细胞分裂中期相，选择分散良好的中期相，放大、拍照、计数。