[发明专利]一种诱导博落回胚状愈伤组织产生的培养基及方法

摘要

本发明一种诱导博落回胚状愈伤组织产生的培养基及方法，属于植物组织培养技术领域。诱导胚状愈伤组织产生的培育基由MS培养基和添加物2,4‑D、IAA、KT和PQQ组成：MS培养基的浓度为4.42g/L；2,4‑D的浓度为0.2～0.6μmol/L；IAA的浓度为4.0～6.5μmol/L；KT的浓度为0.2～0.6μmol/L的；PQQ的浓度为100～1000nmol/L。方法包括如下步骤：(1)外植体选取和灭菌；(2)采用上述培养基进行诱导胚状愈伤组织培养；(3)诱导胚状体培养；(4)体细胞胚胎萌发；(5)成苗培养；(6)再生苗的移栽；(7)大棚培养。本发明外植体选用博落回的茎、叶，培养基在常用植物激素的基础上加以PQQ，本发明提供的培养基及方法能达到快速、高产能培育博落回组培幼苗的目的，能大大缩短博落回成苗时间，适用于大面积生产。

主权项

1.一种诱导博落回胚状愈伤组织产生植株再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)外植体选取和灭菌：将叶片剪成小块，嫩枝剪切成小段，清洗消毒，备用；/n(2)诱导胚状愈伤组织培养：将处理好的叶片、嫩枝接种到培养基一上，暗培养条件下诱导胚状愈伤组织产生；所述培养基一由MS培养基和添加物组成，所述添加物包括2,4-D、IAA、KT和PQQ；所述MS培养基的浓度为4.42g/L；所述2,4-D的浓度为0.2～0.6μmol/L；所述IAA的浓度为4.0～6.5μmol/L；所述KT的浓度为0.2～0.6μmol/L的；所述PQQ的浓度为100～1000nmol/L；/n(3)诱导胚状体培养：将步骤(2)得到的愈伤组织转接到培养基二上，暗培养条件下诱导胚状体产生；所述培养基二由MS培养基和GA₃组成：所述MS培养基的浓度为4.42g/L；所述GA₃的浓度为0.1～0.5μmol/L；/n(4)体细胞胚胎萌发：将步骤(3)得到的胚状体转接到培养基三上光暗结合培养；所述培养基三由MS培养基、IAA和KT组成：所述MS培养基的浓度为4.42g/L；所述IAA的浓度为4.0～6.5μmol/L；所述KT的浓度为0.2～0.6μmol/L；/n(5)成苗：将步骤(4)萌发的胚状体转接到培养基四上光暗结合培养；所述培养基四由MS培养基和PQQ组成：所述MS培养基的浓度为4.42g/L；所述PQQ的浓度为25～200μmol/L；/n(6)再生苗的移栽：步骤(5)将生根苗组培瓶拧开，加入少量水，放置1～2天后移栽到装有炼苗基质的炼苗盒中，进行正常水肥管理；/n(7)大棚培养：炼苗盒中炼苗两周后移栽到大棚，进行正常水肥管理。/n