[发明专利]一种用LMH细胞系生产禽腺病毒4型疫苗的方法及疫苗

摘要

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种用LMH细胞系生产禽腺病毒4型疫苗的方法及疫苗。利用本发明所述方法培养的LMH细胞用于禽腺病毒4型的培养，可在极大地降低生产成本的同时保证病毒的效价，该工艺在较短的时间60h内，即可稳定获得滴度10^8.5TCID₅₀/0.1ml以上的禽腺病毒4型病毒，与现有技术相比具有明显的技术优势。用高滴度的疫苗抗原制备的疫苗可显著提高疫苗的免疫力，经免疫攻毒试验结果证明，对禽腺病毒4型攻击可100％保护。

主权项

1.用LMH细胞系生产禽腺病毒4型疫苗的方法，包括LMH细胞系制备，病毒接种繁殖，病毒收集、浓缩、纯化和疫苗成品配制步骤，其特征在于，所述LMH细胞系制备包括以下步骤：S1、使用含有0.8％(v/v)新生牛血清、100IU/ml青霉素以及0.25％(v/v)N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖的细胞培养液对LMH细胞进行培养，至细胞生长至30～55％密度，使用胰酶‑EDTA对细胞进行消化和分散；S2、使用含有0.8％(v/v)新生牛血清、100IU/ml青霉素以及1.25％(v/v)N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖的细胞培养液对步骤S1得到的LMH细胞进行培养，至细胞生长至60～75％密度，使用胰酶‑EDTA对细胞进行消化和分散；S3、使用含有0.8％(v/v)新生牛血清、100IU/ml青霉素以及2.5％(v/v)N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖的细胞培养液对步骤S2得到的LMH细胞进行培养，直至形成生长良好的细胞单层；S4、将禽腺病毒4型接种到制备得到的LMH细胞单层中并进行病毒吸附，使用含有0.1～1.0％(v/v)新生牛血清和100IU/ml青霉素的细胞维持液于37℃、5％CO₂培养60h，直至细胞病变CPE达到80％以上，收获细胞毒液；S5、将收获的细胞毒液于‑20℃反复冻融2～3次，离心，超滤浓缩，即得制苗病毒液；S6、往制苗毒液中加入灭活剂进行灭活，得疫苗抗原，往疫苗抗原中加入常规乳化剂乳化制得灭活疫苗。