[发明专利]检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法

摘要

本发明公开了一种检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法，涉及医疗技术领域，该检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法建立了HPLC法测定人血浆中伏立康唑血药浓度，旨在为临床合理用药提供参考。该方法包括步骤：色谱条件、溶液配制、血浆样品处理、伏立康唑和内标氯唑沙宗的保留、取适量伏立康唑储备液、配制伏立康唑、配制伏立康唑、取低、中、高质量浓度的质控血浆样品。该方法操作简便，结果准确，适用于人血浆中伏立康唑的检测，可以帮助避免血药浓度过低或过高可能导致的疗效不佳或不良反应增多。该检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法的实验结果符合生物样品的测定要求，适用于临床治疗药物浓度监测及药动学研究。

主权项

1.一种检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法，其特征在于：所述检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法包括如下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(100mm×4.6mm，3.6μm)；流动相：乙腈‑0.01mol·L‑1磷酸二氢钾溶液(35∶65)；流速0.8mL·min‑1；柱温35℃；进样体积15μL；检测波长260nm；(2)溶液配制：对照品溶液精密称取伏立康唑对照品25mg，甲醇溶解并定容至25mL，得到质量浓度为1.0g·L‑1的伏立康唑储备液，置4℃冰箱冷藏备用；内标溶液精密称取氯唑沙宗10mg，甲醇溶解并定容至100ml，得到质量浓度为100mg·L‑1的氯唑沙宗储备液，置4℃冰箱冷藏备用；(3)血浆样品处理：精密移取血浆样品200μL，加入100mg·L‑1的氯唑沙宗内标溶液50μL，加入400μL甲醇溶液，涡旋混匀1min后于14000r·min‑1及4℃条件下离心10min，取上清液15μL进样；(4)伏立康唑和内标氯唑沙宗的保留时间分别为7.86min和4.60min，考察6份不同的空白血浆，结果表明色谱分离良好，血浆中的内源性物质均不干扰血浆中伏立康唑的分析；(5)取适量伏立康唑储备液，用甲醇定量稀释成系列标准溶液，再加入适量空白血浆制得伏立康唑质量浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0mg·L‑1的系列标准血浆样品溶液，按步骤(3)处理后，测定伏立康唑峰面积Ai，内标锋面积As，以Ai/As为纵坐标，所对应各点浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线，经最小二乘法线性回归，得伏立康唑的标准曲线回归方程y＝0.14ρ+0.0028(r＝0.9999)，按RSN＝5确定最低定量限，血浆中伏立康唑的最低定量限为0.2mg·L‑1；(6)配制伏立康唑质量浓度为0.5、5.0、15mg·L‑1的低、中、高3种浓度血浆样品各5份，按照步骤(3)处理，连续测定3天，计算日内和日间精密度；(7)配制伏立康唑质量浓度为0.5、5.0、15mg·L‑1的低、中、高3种浓度血浆样品各5份，按照步骤(3)处理，将实测浓度与加入浓度之比作为相对回收率，将实测浓度与相应浓度对照品溶液浓度之比作为提取回收率；(8)取低、中、高质量浓度的质控血浆样品分别经室温放置12小时、反复冻融3次、自动进样器放置12小时或密闭‑20℃低温保存3个月，然后按照步骤(3)操作后进样测定，每次平行测定5份血浆样品，结果表明血样中伏立康唑在室温放置12小时、反复冻融3次、自动进样器放置12小时或密闭‑20℃低温保存3个月等条件下回收率均为85％～115％，RSD均＜15％。