[发明专利]一种蛋白提取和分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种蛋白提取和分离纯化方法，包括如下步骤：将经低温破壁的螺旋藻，冷冻脆化后，进行超声波破壁处理；按比例加入0.1mol/L的NaCl溶液和711阴离子交换树脂，磨浆0.5min，过滤，调节pH值至7.1～7.3，经加热、冷却后，离心，取上清液，用硫酸铵盐析，取45％～55％盐析出的蛋白质沉淀段得到沉淀A；将沉淀A用柱平衡缓冲液溶解后过经缓冲液平衡过的葡聚糖凝胶G‑50柱，洗脱，收集第6～7ml的洗脱液，透析，冷冻干燥，即得螺旋藻蛋白粉末。本发明通过二次破壁的完美结合，使得螺旋藻蛋白溶出率为80.31％～81.21％，有效的提高螺旋藻蛋白提取率，并提高了所得的螺旋藻蛋白的纯度。

主权项

1.一种蛋白提取和分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将螺旋藻洗净沥干后，置于低温超高压连续细胞破碎机中，进行低温破壁，得到一次破壁的螺旋藻破壁粉；S2、将一次破壁的螺旋藻破壁粉置于‑15℃条件下，冷冻脆化3～5h后，在30～40℃条件下，进行超声波破壁处理，得到二次破壁的螺旋藻破壁粉；S3、向二次破壁的螺旋藻破壁粉加入二次破壁的螺旋藻破壁粉重量0.1～0.3倍的0.1mol/L的NaCl溶液，同时加入二次破壁的螺旋藻破壁粉重量0.04～0.06倍的711阴离子交换树脂，用组织捣碎机磨浆0.5～1.5min得到匀浆液，过滤，调节滤液的pH值至7.1～7.3，快速加热滤液至45～55℃，并维持20～40min，然后迅速冷却至20℃，然后转入离心机离心得到离心上清液；S4、取所得的离心上清液，用硫酸铵盐析，取45％～55％盐析出的蛋白质沉淀段得到沉淀A；S5、将沉淀A用柱平衡缓冲液溶解得到蛋白初溶液B，将蛋白初溶液B通过经缓冲液平衡过的葡聚糖凝胶G‑50柱，以1.5ml/min的流速洗脱，收集第6～7ml的洗脱液即为分离得到的蛋白溶液；S6、向蛋白溶液中加入1～2倍体积的缓冲溶液，再通过3000r·min‑1离心30min除去残留的不溶性物质，采用透析袋在蒸馏水中透析3d，除去硫酸铵，冷冻干燥，即得螺旋藻蛋白粉末。