[发明专利]一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法

摘要

本发明提供一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法，包括如下步骤：将含有丙酮酸氧化酶的表达基因的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至固体培养基上进行活化，得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod；将活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至放于摇床上的LB培养基并进行摇动，得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod的种子液；接种该种子液至TB培养基进行培养，培养至浓度为第一细胞浓度后加入诱导剂进行诱导，当浓度为第二细胞浓度后不断加入盐酸溶液进行发酵至pH值为5.5‑6.5，然后继续诱导，得到菌液I；取菌液I进行离心后倒去上清液，用PBS溶液洗涤两次后用等体积的PBS溶液进行重悬，得到重悬液；对重悬液进行超声破碎，得到超声破碎后的菌液II；取菌液II进行离心，收集含有丙酮酸氧化酶的上清液。

主权项

1.一种获取重组大肠杆菌中丙酮酸氧化酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，将含有丙酮酸氧化酶的表达基因的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至固体培养基上，在第一预定温度下培养第一预定时间后活化，得到活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod；步骤2，将所述活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod接种至LB培养基，而后将该LB培养基放置于摇床上，在第二预定温度下以第一速度摇动第二预定时间，得到所述活化的重组大肠杆菌pET28a‑pod的种子液；步骤3，接种一定量的所述种子液至TB培养基，在第三预定温度下将所述种子液培养至所述种子液的浓度为第一细胞浓度后加入诱导剂进行诱导，在第四预定温度下以第二速度摇动第三预定时间直至浓度为第二细胞浓度，而后不断加入盐酸溶液进行发酵直至pH值为5.5‑6.5，然后继续诱导，得到菌液I；步骤4，取一定质量的所述菌液I在第五预定温度下离心第四预定时间后倒去上清液，而后用PBS溶液洗涤两次，再用等体积的所述PBS溶液进行重悬，得到重悬液；步骤5，将所述重悬液置于超声变幅杆中进行超声破碎，得到超声破碎后的菌液II；步骤6，取一定质量的菌液II在第六预定温度下离心第五预定时间后，收集含有所述丙酮酸氧化酶的上清液。