[发明专利]一种同步包装rAAV的方法在审
| 申请号： | 201810857302.9 | 申请日： | 2018-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN108866011A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 吕斌;孙招金;王志民;蒋新农;唐密天果 | 申请（专利权）人： | 深圳生生凡非基因技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/071 |
| 代理公司： | 深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248 | 代理人： | 胡玉 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区南头*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种同步包装rAAV的方法，其包括以下步骤：对293T细胞进行扩大培养；采用多聚赖氨酸对培养容器进行处理，然后将三个质粒与PEI置于已经处理过的培养容器中进行混合，并于室温下静止作用，所述三个质粒包括载体质粒、包装质粒和辅助质粒；消化293T细胞，得到293T细胞悬液；将293T细胞悬液加入到含有质粒的混合物中，然后进行培养；24小时后将旧液倾去，加入无血清DMEM；72小时收获并纯化浓缩。采用本发明的技术方案，无需提前24小时培养293T细胞，简化了实验步骤，缩短了时间，实现了快速包装，而且减少了血清使用量；该方法简单、易行且重复性高。 | ||
| 搜索关键词： | 质粒 培养容器 细胞悬液 细胞 多聚赖氨酸 无血清DMEM 包装质粒 辅助质粒 快速包装 扩大培养 实验步骤 小时收获 载体质粒 混合物 血清 旧液 静止 浓缩 消化 | ||
【主权项】：
1.一种同步包装rAAV的方法，其特征在于：其包括以下步骤：步骤S1，对293T细胞进行扩大培养；步骤S2，先采用多聚赖氨酸对培养容器进行处理，然后将三个质粒与PEI置于已经处理过的培养容器中进行混合，并于室温下静止作用；其中，所述三个质粒包括载体质粒、包装质粒和辅助质粒；步骤S3，消化293T细胞，得到293T细胞悬液；步骤S4，将293T细胞悬液加入到步骤S2得到的混合物中；步骤S5，将培养容器放入37℃含5% CO2培养箱内进行培养；步骤S6，24小时后将旧液倾去，加入无血清DMEM；步骤S7，72小时收获并纯化浓缩。
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