[发明专利]使用荧光染料检测单个精子的抗精子抗体的方法在审
| 申请号： | 201810868814.5 | 申请日： | 2018-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN108982457A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 曾桥;赵永祥;薛志刚;薛金锋 | 申请（专利权）人： | 同济大学苏州研究院;广西医科大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N33/68 |
| 代理公司： | 宁波高新区核心力专利代理事务所(普通合伙) 33273 | 代理人： | 涂萧恺 |
| 地址： | 215101 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种使用荧光染料检测单个精子的抗精子抗体的方法，其特征在于：包括有以下步骤：(1)采用异硫氰酸作为荧光素标记免抗人IgG和IgA抗体，作为二抗；(2)分离精子和精浆；(3)将步骤(2)分离的精子与步骤(1)的免抗人IgG和IgA于37℃下进行孵育；(4)随后加入碘化丙啶染色对精子进行染色，该碘化丙啶可以与死亡精子核特异性染色，活精子不染色；(5)采用流式细胞仪检测精子检测，与现有技术相比，本发明具有如下优点：本发明提供一种流式细胞术检测抗精子抗体方法，以便本发明是一种简单、快速、灵敏、准确的检测方法，适用于结合精子表面型抗精子抗体检测，并检测和区分死亡存活精子。 | ||
| 搜索关键词： | 精子 抗精子抗体 检测 染色 碘化丙啶 荧光染料 抗人IgG 流式细胞术 流式细胞仪 特异性染色 荧光素标记 存活精子 分离精子 精子表面 精子检测 异硫氰酸 精子核 二抗 孵育 精浆 死亡 灵敏 | ||
【主权项】：
1.一种使用荧光染料检测单个精子的抗精子抗体的方法，其特征在于：包括有以下步骤：(1)采用异硫氰酸作为荧光素标记免抗人IgG和IgA抗体，作为二抗；(2)采集人类精液，并分离精子和精浆；(3)将步骤(2)分离的精子与步骤(1)的免抗人IgG和IgA于37℃下进行孵育，以直接特异性地与精子表面结合的抗精子抗体结合；(4)随后加入碘化丙啶染色对精子进行染色，该碘化丙啶可以与死亡精子核特异性染色，活精子不染色；(5)采用流式细胞仪检测精子，统计分析抗精子抗体阳性精子比率，精子表面结合抗精子抗体的相对密度，以及死亡或存活精子上结合型抗精子抗体的具体情况。
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