[发明专利]一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法

摘要

一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于，活化白念珠菌并孵育流动态白念珠菌生物被膜，利用离子交换树脂提取生物被膜胞外基质，用UPLC‑TOF‑MS鉴别被膜胞外基质中除蛋白质以外的成分。本发明的样本的前处理过程去除蛋白质成分彻底，从而使得蛋白质外组分的检测效果好。

主权项

1.一种白念珠菌生物被膜胞外基质蛋白质外组分的检测方法，其特征在于：包括下列步骤：第一步：白念珠菌活化将白念珠菌接种于SDB培养基中，摇床孵育20～28h；培养液离心后收集真菌细胞，用无菌PBS缓冲液清洗，然后将清洗所得真菌细胞重悬于RPMI‑1640培养基中，再孵育12‑18h，然后在4℃条件下，以2500～3500转/min离心，收集下沉的真菌细胞，添加真菌培养基调整真菌细胞浓度到0.8～1.2×106CFU/ml，得到重悬菌液；第二步：流动态白念珠菌生物被膜孵育将医用导管片在乙醇中浸泡以保持无菌，用无菌水清洗后，再将其加入到所述重悬菌液中，在摇床中孵育，使白念珠菌粘附于所述医用导管片上，然后对粘附在医用导管片上的白念珠菌进行流动孵育，结束后孵育得到形成有成熟生物被膜的白念珠菌；第三步：将形成有成熟生物被膜的白念珠菌加入pH值为7.8的NaH2PO4‑Na2HPO4离子缓冲液中，先涡旋震荡，然后再超声处理得到悬浮液，将强酸性阳离子交换树脂与悬浮液混合，摇床孵育2～4h，接着用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤，以7500～8500rpm/min离心2～4min，得到上清液。