[发明专利]一种生产重组血小板源生长因子的方法

摘要

本发明公开了一种生产重组血小板源生长因子的方法，属于生物技术领域。本发明方法包括：1)构建含有血小板生长因子目的基因的重组CHO细胞株，2)一级种子培养，3)二级种子培养，4)反应器连续流加培养，5)收集上清进行纯化准备。通过本发明提供的在CHO细胞中表达生产rhPDGF‑BB的方法，该方法工艺简单，可以规模化生产，有广阔的应用前景。

主权项

1.一种表达生产重组血小板源生长因子的方法，其特征在于，将来源于人的rhPDGF‑BB基因置于表达载体pCHO1.0中，转化CHO细胞株，获得分泌表达rhPDGF‑BB的工程细胞株，培养该工程细胞株使之生产重组血小板源生长因子，包括以下步骤：1)一级种子培养，2)二级种子培养，3)反应器连续流加培养，用基础培养基将二级种子细胞按1.0×106个/ml的接种密度稀释至2L细胞培养反应器中，得到1L的二级种子细胞与基础培养基混合物；搅拌转速设置为280r/min；pH设置为6.95±0.15，pH值通过碳酸氢钠溶液和CO2进行调节；溶解氧设置为40±20％，氧气气体流量为1.5～400ml/min，根据溶氧消耗情况调整氧气气体流量；1～4天培养温度设置为36.5±0.5℃，第5天降温至33.5±0.5℃，发酵14天结束；连续流加培养过程中，第3、5、7、9、11天用补料培养基进行补料，补料体积为40mL；当葡萄糖浓度低于2.0g/L时，补加葡萄糖浓缩液使葡萄糖浓度增至4.0g/L。