[发明专利]基于特征肽段定量大鼠CYP2E1酶的检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明提供了基于特征肽段定量大鼠CYP2E1酶的检测方法及检测试剂盒，属于生物检和蛋白质技术领域。筛选大鼠CYP2E1酶的特征肽段为定量肽段并人工合成作为分析对照品，同时合成稳定同位素标记肽段为内标。定量肽段与内标肽段的色谱峰面积比值为纵坐标，以系列标准血清样品定量肽段浓度为横坐标，进行线性回归，得到回归方程。待测样本经酶解释放定量肽段，加入标记肽段进样分析，根据线性回归方程，得到样本中大鼠CYP2E1酶的精确含量。本研究选用定量肽段有2条，均合成相应的标记肽段为内标，可以起到相互验证的目的；而检测试剂盒能简化样本前处理步骤，方便实施对大鼠CYP2E1酶的检测。

主权项

1.基于特征肽段定量检测大鼠CYP2E1酶的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：合成根据设计的第一定量肽段、第二定量肽段、第一标记肽段和第二标记肽段并制备梯度浓度的第一定量肽段工作液、第二定量肽段工作液、第一标记肽段工作液和第二标记肽段工作液；将所述第一定量肽段工作液和所述第二定量肽段工作液加入大鼠血清，分别配制成梯度浓度标准血清样本，加入第一标记肽段工作液和第二标记肽段工作液作为内标，进行液相色谱‑质谱分析，得到第一标准曲线和第二标准曲线；将待测样本经变性、还原化、烷基化后酶解，得到酶解片段，分成两份，分别为第一检测样本和第二检测样本，所述第一检测样本与所述第一标记肽段工作液混合得到第一待检样本，所述第二检测样本与所述第二标记肽段工作液混合得到第二待检样本，所述第一待检样本和所述第二待检样本分别进行液相色谱‑质谱分析，得到第一检测数据和第二检测数据；将所述第一检测数据基于第一标准曲线计算得到第一含量值，将所述第二检测数据基于第二标准曲线计算得到第二含量值，综合所述第一含量值和第二含量值，得到样本中大鼠CYP2E1酶的含量。