[发明专利]一种抗乳腺癌药物的高通量筛选方法

摘要

本发明提供了一种抗乳腺癌药物的高通量筛选方法，与以往方法不同，可为癌症患者提供精准个体化治疗选药。本发明通过控制肿瘤细胞培养液中两性霉素B和所述庆大霉素的浓度，可以提高肿瘤细胞的成活率，有效维持细胞形态促进肿瘤细胞对营养物质的吸收。通过控制肿瘤细胞培养液中胰岛素与生长因子EGF的浓度，可以提高肿瘤细胞的生长速率，并提高细胞活性，可以得到大量的高活性肿瘤细胞，同时使用该比例的胰岛素和生长因子可以降低胎牛血清的使用量，由于胎牛血清价格比较昂贵，使用量减少有利于节约资源，并且使用本发明培养的细胞用于药物筛选测定的用药的半数抑制浓度(IC50)误差小，可以减少检测次数。

主权项

1.一种抗乳腺癌药物的高通量筛选方法，其特征在于：具体包括如下步骤：（1）乳腺癌细胞的获得：从新鲜手术或者穿刺标本获取乳腺癌肿瘤组织，消化肿瘤组织，分离得到分散的乳腺癌细胞；（2）乳腺癌细胞的扩增培养：对步骤（1）中得到的乳腺癌细胞在实验室进行保真扩增培养，生成微小肿瘤，即得到乳腺癌重编程类器官；（3）乳腺癌细胞的贴壁培养：将步骤（2）中得到的乳腺癌重编程类器官分散，贴壁培养得到贴壁细胞；（4）药物筛选：将步骤（3）中制备的贴壁细胞进行候选药物处理，并检测细胞生存率，进行药物筛选；步骤（2）中所述的扩增培养是：将步骤（1）中得到的分散肿瘤细胞置于肿瘤细胞培养液中在37℃的CO2孵箱中进行培养，培养2‑3周得到肿瘤细胞株；所述的肿瘤细胞培养液为每500mL含有以下成分：完全DMEM 含4‑10%的胎牛血清  373mL；F12培养基                   125mL；胰岛素                      5‑10μg/mL；两性霉素B                   250‑280ng/mL；庆大霉素                    10‑15μg/mL；霍乱毒素                    0.1‑0.5nM；EGF                         0.125‑0.250ng/mL；氢化可的松                  25‑30ng/mL；ROCK抑制剂Y‑27632           10‑20μmol/L。