[发明专利]一种针对中性疏水性多肽的纯化方法

摘要

本发明公开了一种针对中性疏水性多肽的纯化方法，主要解决现有对于中性疏水性多肽难以纯化，难以获得高纯度产品或者产品得率极低的问题。本发明纯化包括中性疏水性多肽的强弱分类概念，溶解方法的选择，色谱柱的选择，分析与制备流动相的选择以及洗脱收集的步骤。所述的中性疏水性多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu原料的多肽；中性疏水性多肽的溶解方法可以选择六氟异丙醇或尿素中的一种溶解，也可以选择丙酮或异丁醇中的一种大量稀释震荡搅拌，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；色谱柱的选择为以硅胶键合的固定相填料的色谱柱或者以聚苯乙烯二乙烯苯为基质的固定相填料的色谱柱，分析与制备流动相的选择根据溶解方法的不同来选择特有的体系，并进行疏水性多肽的洗脱收集。

主权项

1.一种针对中性疏水性多肽的纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：a、定义中性疏水性多肽的强弱性：1）多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu疏水性氨基酸的个数占有30‑50%，定义为弱中性疏水性多肽；2）多肽序列中含有Ala,Ile,Val,Leu疏水性氨基酸的个数占有50‑100%，定义为强中性疏水性多肽；b、根据中性疏水性多肽的强弱性选择不同的溶解方法：1）针对弱中性疏水性多肽：选择丙酮或异丁醇中的一种大量稀释震荡搅拌，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；2）针对强中性疏水性多肽：选择六氟异丙醇或尿素中的一种溶解，经过硅藻土与硅胶填料不同配比做成的PE柱过滤得清液；c、根据选择不同的溶解方法选择不同的分析与制备的流动相体系：1）当采用丙酮大量稀释震荡搅拌，过硅藻土与硅胶填料的配比为4:1做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择丙酮和高氯酸水溶液做为流动相；2）当采用异丁醇大量稀释震荡搅拌，过硅藻土与硅胶填料的配比为3:2做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择异丁醇和硫酸铵水溶液做为流动相；3）当采用六氟异丙醇溶解多肽，过硅藻土与硅胶填料的配比为4:3做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择三氟乙醇和盐酸水溶液做为流动相；4）当采用尿素溶解多肽，过硅藻土与硅胶填料的配比为1:4做成的PE柱，过滤得清液的溶解方法，选择乙腈和尿素水溶液做为流动相；d、根据选择不同的分析与制备的流动相体积，确定合适的色谱柱：1) 当采用丙酮和高氯酸水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以普通硅胶键合的固定相填料的色谱柱C18，孔径选择300A；2）当采用异丁醇和硫酸铵水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以普通硅胶键合的固定相填料的色谱柱C8或C4，孔径选择300A；3）当采用三氟乙醇和盐酸水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以聚苯乙烯二乙烯苯为基质的固定相填料的色谱柱C18，孔径选择120A；4）当采用乙腈和尿素水溶液做为流动相体系，色谱柱选择以聚苯乙烯二乙烯苯为基质的固定相填料的色谱柱C18，孔径选择300A；e、确立好纯化条件之后，对中性疏水性多肽进行洗脱收集，步骤如下：1）配比硅藻土与硅胶填料不同比例的PE柱；2）选择试剂溶解多肽样品，并使用相应的PE柱过滤得上清液，备用；3）选择的流动相体系冲洗仪器与色谱柱，使整个系统达到平衡状态；4）取上清液注入制备系统，通过仪器检测器信号采集收集样品，得中间体液体；5）对中间体液体进行分析，确立纯度；6）把合格的中间体液体过三氟醋酸盐树脂，得到常规的含有TFA盐的多肽产品；7）对TFA样的多肽产品直接进行液氮冷冻；8）把冷冻好的多肽产品进行低温冷冻干燥机干燥得固体粉末状成品。