[发明专利]烟草悬浮细胞的培养方法

摘要

本发明公开了烟草悬浮细胞的培养方法，包括无菌苗及愈伤组织的获得；愈伤组织的继代培养；悬浮细胞体系的建立；悬浮细胞的再培养。本发明的有益效果是建立了烟草悬浮细胞的培养方法，可以快速获得大量悬浮细胞，用于测定烟草代谢组学和细胞生物学等其它相关指标及分析研究。采用本发明制备烟草悬浮细胞，生产周期短、增殖速度快、产量较大、细胞分散性好，操作便捷，利于大规模生产操作。

主权项

1.烟草悬浮细胞的培养方法，其特征在于按照以下步骤进行：步骤1：无菌苗及愈伤组织的获得；(1)将烟草种子依次用清水冲洗，用乙醇浸泡，无菌水冲洗，H2O2浸泡，无菌水冲洗，播种于MS固体培养基中；(2)将无菌幼苗转接到MS固体培养基中培养，获得无菌组培苗；(3)将无菌幼苗叶片剪成小块，平铺于愈伤组织诱导培养基中，温室内暗培养，长出乳白色愈伤组织；步骤2：愈伤组织的继代培养；取长势较好，无褐化的愈伤组织转接到新的相同培养基中，2周转接一次，保证愈伤组织的营养含量及无菌环境，继代3代后，得到分散性较好且松脆的愈伤组织；步骤3：悬浮细胞体系的建立；取愈伤组织碾碎，接种到悬浮细胞液体培养基，保证装悬浮细胞液体培养基的容器的溶氧和通气充分；步骤4：悬浮细胞的再培养；将上层的悬浮细胞液转移到无菌空三角瓶中继续振荡培养，3天后采用同样的方法再转接一次，7‑8天后采用同样的方法再转接一次，将悬浮细胞经筛网过滤后接种到新鲜培养基中继续振荡培养，用同样的方法连续培养3代后，可获得稳定且分散性较好的悬浮细胞，建立稳定的烟草细胞悬浮培养体系。