[发明专利]一种测定青芥辣中山葵含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定青芥辣中山葵含量的方法，属于分子生物学技术领域。利用液氮研磨使得山葵细胞充分破壁，利用植物基因组提取试剂盒提高基因组浓度、纯度，这两种方法结合有利于最大限度减小破壁不充分、基因组浓度低对山葵基因组得率的影响，从而影响到山葵含量测定准确性。本发明提取到的山葵基因组得率为传统方法的1.45～3倍，测量的准确度更高，测量误差小于10％。且从操作上来说，本方法简单容易实行，所需试剂都比较普通，能够节省实验室经济成本。

主权项

1.一种测定青芥辣中山葵含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）将青芥辣样品加入无菌研钵中，倒入液氮充分研磨，直至样品成粉末，备用；（2）提取步骤（1）所得样品粉末的基因组；（3）根据山葵的myr基因和辣根的trnL基因序列，设计用于荧光定量PCR的特异性引物；（4）将山葵和辣根基因组稀释成不同浓度，通过荧光定量法测定不同浓度山葵和辣根基因的阈值循环数（Ct）；（5）通过荧光定量法测定样品中山葵和辣根阈值循环数（Ct），以辣根基因为参比基因，选择步骤4中任一山葵基因组浓度的样品作为标准样品，根据相对定量的方法计算出青芥辣样品中山葵的含量；其中，所述山葵的myr基因序列的PCR特异性引物为：正向引物：ACGCCCAGCCAACTAAAACAATA反向引物：CACCCGTCTCCTTGATGACCTTA辣根的trnL基因序列的PCR特异性引物为：正向引物：GGTAGTGAACTCCATTTG反向引物：ACGGACTTAATTAGATTGAG。