[发明专利]一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法

摘要

本发明公开了一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，该方法是将生物素和荧光基团标记的底物链(Zn‑Sub)装配在磁珠(MBs)上作为检测探针。在分析过程中，Zn2+特异性DNA酶链(Zn‑Enz)与Zn‑Sub链杂交。在目标Zn2+存在下，Zn‑Sub链被剪切，导致含有荧光基团的较短DNA片段的释放和Zn‑Enz链的解离。解离的Zn‑Enz链将与其他未被剪切的Zn‑Sub链杂交，并同样地进行剪切，从而建立一个目标Zn2+循环放大机制，累积信号得以放大。相对于现有技术，本发明方法降低了背景信号干扰，检测限制降低至32fM，线性范围为100fM至10nM(r20.992)。该方法可用于测定自来水或婴幼儿奶粉样品中的Zn2+，具有流程少、操作简单、检测效率高等优点。

主权项

1.一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取链霉亲和素包被磁珠(MBs)，离心，磁力架放置，将沉淀物用偶联缓冲液洗涤后，分散在偶联缓冲液中，加入生物素和荧光素双标记的Zn‑Sub链，涡旋，离心，磁力架放置，分离出沉淀物，得Zn‑Sub‑MB缀合物；(2)用剪切缓冲液将Zn‑Sub‑MB缀合物洗涤后，分散在剪切缓冲液中，配制成Zn‑Sub‑MB缀合物溶液；(3)将Zn‑Enz链和不同浓度的ZnCl2溶液加入到上述Zn‑Sub‑MB缀合物溶液中，孵化，离心，磁力架放置，取上清液，在荧光素的最大激发波长检测荧光强度，绘制锌离子与荧光强度相关的标准曲线；(4)检测时，将Zn‑Enz链和含有锌离子的待测物加入到上述Zn‑Sub‑MB缀合物溶液中，孵化，离心，取上清液，检测其中荧光素的荧光强度，从上述标准曲线上计算待测物中锌离子浓度。