[发明专利]瓜类病原真菌多重PCR检测试剂盒及其同时检测方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种瓜类病害的检测方法，主要针对瓜类3种重要病原真菌甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和/或烟色织孢霉的同时检测。该瓜类病原真菌多重PCR检测试剂盒包括以下组分：PCR buffer，10×PCR buffer；甜瓜黑点根腐病菌上下游引物10μmol/L，瓜类蔓枯病菌上下游引物10μmol/L，烟色织孢霉上下游引物10μmol/L；DNA聚合酶；无菌去离子水；阳性对照：甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和烟色织孢霉无侵染活性的阳性对照。本发明的优点是能同时检测瓜类3种重要病原真菌，快速准确，避免了常规PCR的重复检测。

主权项

1.一种瓜类病原真菌多重PCR检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒用于甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和/或烟色织孢霉三种瓜类病原真菌的同时检测，具体包括以下组分：PCR buffer，10×PCR buffer，20‑250μL；PCR扩增引物为甜瓜黑点根腐病菌上游引物，浓度为10μmol/L，5‑30μL；甜瓜黑点根腐病菌下游引物，浓度为10μmol/L，5‑30μL；瓜类蔓枯病菌上游引物，浓度为10μmol/L，5‑30μL；瓜类蔓枯病菌下游引物，浓度为10μmol/L，5‑30μL；烟色织孢霉上游引物，浓度为10μmol/L，5‑30μL；烟色织孢霉下游引物，浓度为10μmol/L，5‑30μL；DNA聚合酶，5‑20μL；无菌去离子水80μL‑1mL；阳性对照，甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和烟色织孢霉无侵染活性的阳性对照各6‑60μL；所述PCR扩增引物分别为：甜瓜黑点根腐病菌上游引物为：5′‑ CTTACCTATGTTGCCTCGGCG‑3′；甜瓜黑点根腐病菌下游引物为：5′‑AAGAGTTTAGATGGTCCACCGG ‑3′；瓜类蔓枯病菌上游引物为：5′‑ GCAGTCAATCCTTATCC‑3′；瓜类蔓枯病菌下游引物为：5′‑ CGAAAGATTGTGTGACC‑3′；烟色织孢霉上游引物为：5′‑ CGACGATACTTCTGAGTGTTCT‑3′；烟色织孢霉下游引物为：5′‑ AATGCGAGGCTGATGCTA‑3′。