[发明专利]一种全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体的制备方法

摘要

本发明涉及一种全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体的制备方法，属于抗体制备技术领域。本发明所述制备方法包括以下步骤：1)采用O型口蹄疫病毒，对牛进行第一、第二和第三次免疫；2)筛选O型口蹄疫病毒抗原特异性单个B细胞；3)扩增牛抗体重链和轻链的可变区基因；4)牛抗体重链和轻链的恒定区序列的获取；5)制备全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体；6)将全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体共转染细胞，取细胞培养上清，纯化得到全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体。本发明所述制备方法利用不同口蹄疫毒株感染牛，筛选得到能中和三个谱系O型FMDV的中和抗体，能够获得全牛源广谱中和单克隆抗体。

主权项

1.一种全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体的制备方法，包括以下步骤：1)采用O型口蹄疫病毒，对牛进行第一次免疫，第一次免疫后30～60d内，进行第二次免疫，第一次免疫后第120～150d内，进行第三次免疫；所述O型口蹄疫病毒包括以下三个谱系：东南亚拓扑型毒株、中国拓扑型毒株和中东南亚拓扑型毒株；所述第一次免疫、第二次免疫、第三次免疫采用的O型口蹄疫病毒的谱系不同；2)第三次免疫后，分离外周血单个核细胞，利用诱饵抗原筛选O型口蹄疫病毒抗原特异性单个B细胞；所述诱饵抗原包括生物素或荧光蛋白标记的O型口蹄疫病毒；3)以步骤2)获得的O型口蹄疫病毒抗原特异性单个B细胞的cDNA为模板，扩增牛抗体重链和轻链的可变区基因；4)以牛外周血单个核细胞总cDNA为模板，扩增牛抗体重链和轻链的全长序列，得到牛抗体重链和轻链的恒定区序列；5)将步骤3)获得的牛抗体重链可变区基因与步骤4)获得的牛抗体重链恒定区序列构建入表达载体中，得到全牛源单抗的全长重链载体；将步骤3)获得的牛抗体轻链可变区基因与步骤4)获得的牛抗体轻链恒定区序列构建入表达载体中，得到全牛源单抗的全长轻链载体；6)将步骤5)得到的全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体以1：(1～3)的质量比混合，共转染细胞，取转染细胞培养后取上清，纯化得到全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体；所述步骤3)和4)没有先后顺序的限定。