[发明专利]长江三角洲白山羊毛囊干细胞分离培养方法

摘要

本发明提供了长江三角洲白山羊毛囊干细胞分离培养方法，采用该方法分离细胞系生长分裂状态良好且可以获得较纯的毛囊干细胞，呈现典型的铺路石状，原代细胞生长速度较快，第三天就可以观察到细胞出现聚集性生长，第四天就可以看到较多呈现聚集性生长的细胞团块，第五天就可以长满培养皿的60%‑70%，且毛囊干细胞标记物阳性率达到90%以上。经细胞染色体分析、毛囊干细胞标记物检测，以及细胞活力检测等结果表明，所构建的长江三角洲白山羊毛囊干细胞系活力旺盛、毛囊干细胞标记物阳性率高，可为研究皮肤细胞基因表达与通路调控，皮肤附属结构的生长与分化机制，尤其是皮肤主要细胞间的相互作用机制研究提供良好的实用模型。

主权项

1.一种长江三角洲白山羊毛囊干细胞分离培养方法，其特征是，包括以下步骤：1）样本采集于海门山羊，选取120胎龄的胎羊，采集其颈背部皮肤冲洗消毒后带回实验室；2）将步骤1）中的样本切成2mm×2mm的组织块，放入胰蛋白酶中，在37℃饱和湿度的培养箱中消化90min；3）随即拿出并更换含10%胎牛血清的培养液，并在体视显微镜下用外科神经镊挑取毛囊；4）把收集到的毛囊组织再次放入0.25%胰蛋白酶中37℃消化30min后，用匀浆器匀浆，过200目细胞筛，37℃饱和湿度培养，每隔3天换液观察细胞生长情况；5）待原代毛囊干细胞生长至汇合60%‑70%时，进行传代培养。