[发明专利]利用单亚基RNA聚合酶进行体外转录合成sgRNA的方法有效
| 申请号： | 201810939835.1 | 申请日： | 2018-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN108998483B | 公开（公告）日： | 2021-04-30 |
| 发明（设计）人： | 朱斌;陆雪玲;夏恒;黄锋涛;吴慧;余兵兵;闫艳 | 申请（专利权）人： | 武汉核圣生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 徐瑛;祝蓉蓉 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： |
本发明公开一种利用单亚基RNA聚合酶进行体外转录合成sgRNA的方法，所述的单亚基RNA聚合酶，为来自 |
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| 搜索关键词： | 利用 单亚基 rna 聚合 进行 体外 转录 合成 sgrna 方法 | ||
【主权项】：
1.利用单亚基RNA聚合酶进行体外转录合成sgRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、获得所需sgRNA的DNA转录模板；S2、加入所述单亚基RNA聚合酶，转录模板，pH8.0Tris‑HCl，DTT，氯化镁，亚精胺，四种核糖核苷三磷酸ATP、GTP、CTP、UTP，RNA酶抑制剂，无机焦磷酸酶，DEPC水混合后进行体外转录反应；S3、加入DNase I去除DNA模板；S4.纯化回收转录产物；所述单亚基RNA聚合酶为![]()
类噬菌体KP34的RNA聚合酶,所述sgRNA如序列表SEQ ID NO.1所示。
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