[发明专利]一种基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法

摘要

本发明公开了一种基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法，涉及EGFR突变基因的检测。本发明提出了一种基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法，该方法先将多种针对EGFR突变基因的特异性检测探针固定在固相载体上，然后通过modified ARMS‑PCR扩增待检样品中含突变基因的片段，最后将扩增后的片段与固相载体上的探针进行杂交，从而达到判检样品中是否含有特定EGFR突变位点的目的。本发明同时提出一种利用该方法诊断EGFR突变基因的试剂盒。本发明具有灵敏度高、准确性高、特异性强，能同时检测出多种EGFR突变基因的优点。

主权项

1.一种基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：制备针对不同EGFR突变位点的特异性检测探针，所述检测探针包括15‑35bp的碱基序列，所述碱基序列的中部位置包含对应的EGFR突变基因相应的碱基序列；第二步：将针对不同EGFR突变位点的检测探针分别固定在固相载体的不同位置上或者固定在含有不同编码信息的固相载体上，所述固相载体上需能结合并固定检测探针；第三步：制备对应不同EGFR突变位点的扩增引物组和针对不同突变位点用以提高反应特异性的blocker组，所述一对引物中的至少一条引物使用标记物进行标记，然后利用modified ARMS‑PCR体系扩增待检样品中含突变基因的片段；第四步：将第三步扩增获得的基因片段与第二步所得的固定有不同特异性检测探针的固相载体进行杂交，从而达到捕获目的扩增片段的目的；第五步，根据扩增引物上的标记物，采用酶促显色、化学发光或者荧光确定待检样品是否存在以及对应的EGFR突变基因类型。