[发明专利]一种基于荧光编码微球的EGFR突变基因检测方法

摘要

本发明公开了一种基于荧光编码微球的EGFR突变基因检测方法，涉及EGFR突变基因的检测。本发明提出了一种基于荧光编码微球的EGFR突变基因检测方法，该方法先将多种针对EGFR突变基因的特异性检测探针分别固定在不同的荧光编码微球上，然后通过modified ARMS‑PCR扩增待检样品中含有突变基因的片段，最后将扩增后的片段与表面固定了特定检测探针的多种编码微球进行杂交，并通过流式细胞术或者荧光成像技术达到判断待检样品中是否含有特定EGFR突变位点的目的。本发明同时还提出了一种用于检测EGFR突变基因的试剂盒。本发明具有灵敏度高、准确性高、特异性强，能同时检测出多种EGFR突变基因的优点。

主权项

1.一种基于荧光编码微球的EGFR突变基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：制备针对不同EGFR突变位点的特异性检测探针，所述检测探针包括15‑35bp的碱基序列，所述碱基序列的中部位置包含对应的EGFR突变基因相应的碱基序列；第二步：将针对不同EGFR突变位点的检测探针分别固定在具有不同编码信息的荧光编码微球上，所述荧光编码微球能结合并固定检测探针；第三步：制备对应不同EGFR突变位点的扩增引物和针对不同位点用以提高反应特异性的blocker，所述一对引物中的至少一条引物使用报告荧光分子进行标记，然后利用modified ARMS‑PCR体系扩增待检样品中含突变基因的片段；第四步：将第三步扩增获得的基因片段与第二步所得的固定有检测探针的荧光编码微球进行杂交，从而达到荧光编码微球能特异性捕获目的扩增片段的目的；第五步，通过流式细胞术或者荧光成像技术检测荧光编码微球的编码信息以及微球表面的报告荧光信号，确定待检样品是否存在以及对应的EGFR突变类型。