[发明专利]基于丝素蛋白用于乳腺癌靶向联合化疗的纳米药物及制备

摘要

本发明公开了基于丝素蛋白用于乳腺癌靶向联合化疗的纳米药物及制备。以再生丝素蛋白为载体，用溶剂挥发法制备同时载有姜黄素（CUR）和五氟尿嘧啶（5‑FU）的纳米药物，并在其表面修饰靶向分子透明质酸（HA）。该纳米粒子具有较小的水合粒径（198.0±1.8nm），较好的尺寸均一性（PDI：0.097），较高的载药量（CUR：2.1%；5‑FU：1.7%），分散性好、不易团聚，方便构建多功能的载药丝素蛋白纳米粒子。本发明得到的基于丝素的靶向纳米药物能有效抑制肿瘤细胞增殖，提高抗癌药物在细胞内的浓度。表面修饰的透明质酸（HA），增强了单一药物对乳腺癌的治疗效果，在癌症治疗中实现了协同效应。

主权项

1.基于丝素蛋白用于乳腺癌靶向联合化疗的纳米药物，其特征在于，所述的纳米药物包含两种抗肿瘤药物、丝素蛋白和靶向肿瘤部位的药物，所述的两种抗肿瘤药物为姜黄素（Curcumin， CUR）和五氟尿嘧啶（5‑Fluorouracil，5‑FU），所述的丝素蛋白为从新鲜蚕茧中提取出的再生丝素蛋白以及在纳米药物中作为具有良好生物相容性的载体材料，所述的靶向肿瘤部位的药物为透明质酸（Hyaluronan acid，HA）；所述的基于丝素蛋白用于乳腺癌靶向联合化疗的纳米药物的制备方法，包括以下步骤：（1）蚕茧经弱碱溶液脱胶后，用溴化锂溶液完全溶解，在经去离子水透析后得到再生丝素蛋白；（2）将再生丝素蛋白溶解在二次水中，室温水化过夜，得到水化后的再生丝素蛋白；（3）称取适量姜黄素（Curcumin， CUR）和五氟尿嘧啶（5‑Fluorouracil，5‑FU），然后完全溶解在甲醇中，得到溶解有CUR和5‑FU的甲醇溶液；（4）在涡旋条件下将步骤（2）得到的水化后的再生丝素蛋白滴加到步骤（3）得到的溶解有CUR和5‑FU的甲醇溶液中，此时溶液变浑浊成乳浊液，得到含CUR和5‑FU的乳浊液；所述的水化后的再生丝素蛋白与溶解有CUR和5‑FU的甲醇溶液的体积比为1:5；（5）将步骤（4）得到的含CUR和5‑FU的乳浊液涡旋3 min；（6）将步骤（5）得到的乳浊液立刻放入冰浴中，探头超声1 min，超声10 s，暂停2 s；（7）将步骤（6）得到的乳浊液旋转蒸发30 min，蒸发掉大部分有机溶剂甲醇；（8）将步骤（7）得到的乳浊液在通风橱中搅拌3 h，使有机溶剂充分挥发完全；（9）将步骤（8）得到的乳浊液低速离心后收集上清液；（10）将步骤（9）得到的上清液高速离心后，弃去上清液，收集粒子；（11）将步骤（10）收集的粒子重新悬浮在醋酸缓冲液中，加入透明质酸（Hyaluronan acid，HA）修饰液，室温搅拌反应2 h，然后探头超声1 min/次，超声3次，超声10 s，暂停2 s，得到HA修饰的丝素纳米粒子悬浮液；（12）将步骤（11）得到的HA修饰的丝素纳米粒子悬浮液低速离心后收集上清液，上清液再次探头超声1 min，超声10 s，暂停2 s；（13）将步骤（12）得到的上清液高速离心后，弃去上清液，收集粒子；（14）将步骤（13）得到的粒子用二次水悬浮，加入0.1克/毫升的海藻糖（Trehalose）溶液，二次水和海藻糖溶液体积比为1:1；（15）将步骤（14）的纳米粒子冷冻干燥后保存于‑20℃，得到基于丝素蛋白用于乳腺癌靶向联合化疗的纳米药物。