[发明专利]一种基于免疫细胞测定GO生物学效应的方法

摘要

本发明提供一种基于免疫细胞测定GO生物学效应的方法，涉及GO生物学效应技术领域。具体包括PBS和MTT溶液的制备、GO分散液的制备、免疫细胞的培养、GO分散液的摄入和免疫细胞的处理跟踪实验等步骤，其中免疫细胞的处理跟踪实验包括细胞生长状况的测定、增值率的测定和细胞微丝骨架蛋白含量的测定等步骤。本发明通过摄有GO的免疫细胞在不同时间内进行培养，从而在体外模拟GO的生物安全性，根据多项数据测定出GO对细胞的生物学效应，并且通过排除其他外界因素对实验结果的干扰和影响，使得测定结果准确度高，可靠性强。

主权项

1.一种基于免疫细胞测定GO生物学效应的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备两个PBS溶液，将粉状MTT溶于其中一个PBS溶液中，抽滤灭菌得MTT试剂备用；(2)将GO放入真空干燥箱中进行干燥，干燥后将GO分散在二次水中并进行超声分散，分散后再将其进行不等量分装，再分别加入二次水得到不同浓度的GO分散液备用；(3)将上述步骤(2)中的不同浓度的GO分散液倒入24孔板内，然后将免疫细胞接种到24孔板中的GO分散液内，再将孔板放在培养箱中开放培养不同时间后分别吸去培养液，并倒在显微镜下观察细胞的形态；(4)通过MTT溶液对免疫细胞继续进行培养，培养处理后测定每孔的吸光度值，取平均值后将吸光度值转换成细胞相对增值率，然后将各组的细胞相对增值率转换成细胞毒性级别；(5)用胰酶消化免疫细胞，吹打后得到单细胞悬液，在培养皿中制作免疫细胞爬片，再放入细胞培养箱中培养，培养并处理后加入FITC标记的鬼笔环肽稀释液进行反应，再用DAPI对免疫细胞进行染色，再用抗淬灭封片剂进行封片，从而完成免疫细胞微丝骨架结构标记实验。