[发明专利]一种玉米自交系SL1303幼胚转化方法

摘要

本发明属于作物遗传育种领域，具体涉及一种玉米自交系SL1303幼胚转化方法，包括如下步骤：1）愈伤组织诱导：在无菌操作台中剥取幼胚，用镊子将玉米种子固定住，将玉米的胚挑出，沿胚轴纵切成两半，然后置于诱导培养基上进行诱导培养；2）继代培养：将诱导产生的愈伤切去内生芽，接种至继代培养基中25℃暗培养7天，继代两次，统计产生胚性愈伤组织；3）分化培养：将长出胚性愈伤组织转入再生培养基中，25℃光照培养至长芽；4）生根培养：待长出完整的再生苗后转入生根培养基中，进行生根壮苗，根长至4cm左右，进行炼苗移栽。本发明建立了一个高效的玉米自交系SL1303幼胚转化方法，为今后利用该体系进行玉米自交系SL1303的转基因提供了坚实的基础。

主权项

1.一种玉米自交系SL1303幼胚转化方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）愈伤组织诱导：在无菌操作台中剥取幼胚，用镊子将玉米种子固定住，将玉米的胚挑出，沿胚轴纵切成两半，然后将胚的外侧面向上置于诱导培养基上；先在34℃高温下诱导暗培养3天；再放在培养箱25℃，暗培养7天；（2）继代培养：将诱导产生的愈伤组织切去内生芽，接种至继代培养基中25℃暗培养7天，继代两次，统计产生胚性愈伤组织；（3）分化培养：将长出的胚性愈伤组织转入分化培养基中，25℃，光照培养至长芽；（4）生根培养：待长出完整的再生苗后转入生根培养基中，28℃，每天16小时光照，进行生根壮苗，根长至4‑5cm，进行炼苗移栽；其中，所述的愈伤组织诱导培养基为：以MS培养基为基本培养基，添加终浓度为30g/L 的碳源、3g/L 的凝胶剂、2‑6mg/L的2,4‑D、500mg/L 的CA ；500mg/L的脯氨酸；所述的继代培养基为：以MS培养基为基本培养基，添加终浓度为30g/L 的碳源、3g/L 的凝胶剂、2～6mg/L的2,4‑D、500mg/L 的CA 、1g/L的脯氨酸、0.85mg/L的AgNO3；所述的分化培养基为：以N6培养基为基本培养基，添加终浓度为60g/L 的碳源、3g/L 的凝胶剂、0.7g/L的脯氨酸、0.85mg/L的AgNO3、1mg/L的KT、10mg/L的NAA、1mg/L的ZT；所述的生根培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基，添加终浓度为30g/L 的碳源、3g/L 的凝胶剂、500mg/L的CA 、0.5g/L的脯氨酸、0～0.4mg/L的IBA。