[发明专利]定量检测华南梅花鹿血液中齐墩果酸的方法

摘要

本发明公开了一种定量检测华南梅花鹿血液中齐墩果酸的方法：在甲醇中加入齐墩果酸标准品并稀释成系列浓度的对照品标准液；对照品标准液中加入白术内酯II标准品作为内标液A，在内标液A中加入不含齐墩果酸的梅花鹿血清处理后进行高效液相色谱分析；以齐墩果酸的质量浓度为横坐标，以齐墩果酸与白术内酯II峰面积比值作为纵坐标，绘制标准曲线；在内标液B中加入待测梅花鹿血清经处理后进行高效液相色谱分析，将待测梅花鹿血清中齐墩果酸与白术内酯II峰面积比值代入所述标准曲线中，得到梅花鹿血清中齐墩果酸的质量浓度。采用该方法检测齐墩果酸具有准确性高的优点。

主权项

1.定量检测华南梅花鹿血液中齐墩果酸的方法，其特征是包括以下步骤：1)、在色谱甲醇中加入齐墩果酸标准品，漩涡混合均匀后，得齐墩果酸浓度是20μg/mL的对照品母液；利用色谱甲醇将对照品母液稀释成系列浓度的对照品标准液；对系列浓度中的每种对照品标准液均分别依次进行以下步骤2)～5)：2)、系列标准血清的处理：2.1)、在容器中加入对照品标准液以及加入白术内酯II标准品，漩涡混合均匀，使得容器中白术内酯II浓度均为20μg/mL，从而对应形成与该对照品标准液相对应的内标液A；2.2)、在容器中加入内标液A，于40±5℃水浴中氮气流挥干容器中的色谱甲醇，再向容器中加入与内标液A等体积的不含齐墩果酸的梅花鹿血清，漩涡混匀；3)、在步骤2.2)的所得物中加入为步骤2.2)内标液A 10±1倍体积量的提取试剂；振荡混匀后以6000±600r/min进行离心，离心所得的上清液为有机相；对有机相进行干燥处理；4)、将步骤3)所得的干燥处理后的有机相溶解于流动相中，于18000±2000r/min离心后，获取位于上层的液体层；流动相的体积为步骤2.2)内标液A体积的1/2，所述流动相同步骤5)的流动相；5)、将步骤4)所得的液体层进行高效液相色谱分析，检测条件如下：以体积比为78：22的乙腈与0.05％磷酸溶液作为流动相，流速1.0mL/min、进样量20μL、检测波长为210nm、色谱柱温度为35℃；分别获得标准血清中齐墩果酸与白术内酯II的吸收峰面积比；由于对系列浓度中的每种对照品标准液分别进行上述步骤2)～5)，从而获得系列浓度中的每种对照品标准液对应的标准血清中齐墩果酸与白术内酯II的吸收峰面积比；6)、以系列标准血清中齐墩果酸的质量浓度为横坐标，以系列标准血清中的齐墩果酸与白术内酯II峰面积比值作为纵坐标，绘制标准曲线；7)、在容器中加入白术内酯II浓度为20μg/mL的色谱甲醇溶液作为内标液B，于40±5℃水浴中氮气流挥干容器中的色谱甲醇，再向容器中加入与内标液B等体积的待测梅花鹿血清；漩涡混匀；所述内标液B与步骤2.2)的内标液A等体积；8)、以步骤7)的所得物替代步骤2.2)的所得物，进行步骤3)～步骤5)，从而获得待测梅花鹿血清中齐墩果酸与白术内酯II峰面积比值；将待测梅花鹿血清中齐墩果酸与白术内酯II峰面积比值代入所述标准曲线中，得到梅花鹿血清中齐墩果酸的质量浓度。