[发明专利]一种能够排除抗体信号干扰的免疫共沉淀方法

摘要

本发明提供了一种能够排除抗体信号干扰的免疫共沉淀方法。所述免疫共沉淀方法使用交联剂DSS将抗体和Protein‑A/G琼脂糖珠交联，然后通过添加不含巯基乙醇的加样缓冲液处理目的蛋白‑抗体‑Protein‑A/G琼脂糖珠复合物，最后离心去除抗体‑Protein‑A/G琼脂糖珠复合物，上清中只留下目的蛋白，从而在蛋白质印迹实验中避免抗体重链和轻链分子信号对目的蛋白检测的干扰。

主权项

1.一种能够排除抗体信号干扰的免疫共沉淀方法，其特征在于，包括以下步骤：A、蛋白提取：取生物样品，裂解后离心后取样品上清液；B、制备Protein‑A/G琼脂糖珠悬液；C、取步骤A得到的样品上清液和步骤B得到的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液，混合后进行孵育，离心后取上清液；D、取步骤B得到的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液，分别加入抗体和IgG，得到含有抗体的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液和含有IgG的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液；E、向步骤D得到的含有抗体的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液和含有IgG的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液中分别加入交联剂，交联剂的终浓度为1mM‑5mM，并进行孵育，离心去除上清后分别得到交联有抗体的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液和IgG的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液；F、将步骤C得到的样品上清液分成3份，分别作为Input样品、IP样品和IgG样品；将所述IP样品和步骤E得到的交联有抗体的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液混合并孵育，得到混合IP样品；将所述IgG样品和步骤E得到的交联有IgG的Protein‑A/G琼脂糖珠悬液混合并孵育，得到混合IgG样品；G、对步骤F得到的混合IP样品和混合IgG样品分别进行洗脱；H、分别取步骤F得到的Input样品、步骤G洗脱后的混合IP样品和混合IgG样品，使用SDS‑PAGE银染法，检测蛋白的含量。