[发明专利]一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法

摘要

本发明公开了一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，属于植物抗病性鉴定技术领域，包括以下步骤：培养基的制备：原料包括琼脂和固体营养颗粒，采用凝胶法制备培养基，所述固体营养颗粒为具有四层的球形颗粒；接种体的分离；接种体鉴定；接种体保存；接种体复壮；接种孢子制备；鉴定材料准备；对照品种选择；接种及接种后的管理；发病指数的调查；抗性评价。该方法操作简便、成本低廉，且运用的培养基培养西瓜炭疽病菌成功率高、周期短，本方法可用于选育和推广的西瓜品种进行炭疽病抗性鉴定，大大降低或避免炭疽病的危害，对抗病新品种的选育、推广及综合利用具有重要意义。

主权项

1.一种西瓜炭疽病抗性室内鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：培养基的制备：取琼脂和固体营养颗粒采用凝胶法制备培养基，并将培养基制备成平面培养基和斜面培养基，所述固体营养颗粒为维生素、石蜡、葡萄糖、氨基酸、明胶、网状大豆蛋白纤维、蜂蜜制备的多层球形颗粒；接种体的分离：剪取西瓜叶片的病键部，于浓度为75wt％的乙醇溶液中浸泡30s，取出用0.1wt％次氯酸钠溶液浸泡1min后，插入平面培养基中，于黑暗环境中暗培养2‑3d，出菌丝后转接到新的平面培养基上，得到接种体；接种体鉴定：提取接种体的菌丝DNA进行PCR扩增，将得到的PCR扩增产物进行凝胶电泳分析，并进行DNA序列对比，得到西瓜炭疽病病原菌接种体；接种体保存：将鉴定为西瓜炭疽病病原菌的接种体进行分离纯化，然后转接到斜面培养基于26‑28℃进行暗培养3‑4d；接种体复壮：将保存的接种体在平面培养基上于26‑28℃进行暗培养3‑4d，将培养的菌丝接种于病感西瓜叶上，于温度为26‑28℃、相对湿度为85‑90％进行昼夜培养，待叶片发病后将接种体分离，得到分离物；接种孢子制备：将分离物转接于平面培养基上，于26‑28℃培养箱进行暗培养7‑8d，待菌丝长满平面培养基后，洗下孢子，制备成悬浮液；鉴定材料准备：选取西瓜幼苗的成熟叶，放入75wt％乙醇中浸泡1min，1wt％次氯酸钠溶液浸泡2min后，将1/2的成熟叶接种悬浮液，1/2的成熟叶接种无菌水；对照品种选择：选取中抗品种、高抗品种作为各抗性等级的对照品种，以各鉴定材料与对照品种相比的相对抗性判定鉴定材料的相对抗性；接种及接种后的管理：每片成熟叶接种后，将平面培养基置于温度26‑28℃、相对湿度80％条件下的人工气候箱内培养；发病指数的调查：接种7‑8d后进行病情调查，观察每片成熟叶接种处的病斑发生情况，记载各个病级叶片数；抗性评价：以参鉴品种的病情指数分别与对照品种的病情指数进行比较。