[发明专利]一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法在审
| 申请号： | 201810977457.6 | 申请日： | 2018-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN109097323A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 魏坤;万淑倩;杨业国;牛雪明;罗逍 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/077 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍;江裕强 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法。该方法为：将第2‑10代小鼠胚胎成纤维细胞接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化，稀释，铺板。在37℃，5% CO2的细胞培养箱中孵育24h后，向不同的孔中加入不同浓度的油酸进行诱导，在37℃，5% CO2孵育24h后，诱导完成，进行油红O染色观察。本发明用不同浓度OA直接在体外诱导分化出脂肪细胞，成功率高，而且诱导周期短只需要24h，大大缩短了传统方法的诱导周期，而且该方法操作简单，诱导出的脂肪细胞形态均一，大小可控，为体外构建脂肪细胞模型提供了一个简单高效的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 脂肪细胞 诱导 小鼠胚胎成纤维细胞 油酸 体外诱导 孵育 体外诱导分化 脂肪细胞形态 分化 细胞培养瓶 细胞培养箱 油红O染色 铺板 模型提供 体外构建 贴壁生长 细胞细胞 胰酶消化 均一 可控 稀释 成功率 接种 细胞 观察 | ||
【主权项】：
1.一种用油酸体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将第2‑10代小鼠胚胎成纤维细胞（3T3‑L1）接种到细胞培养瓶内，待细胞细胞贴壁生长至细胞密度为80%时，用胰酶消化下来，离心和重悬，进行传代；步骤二、将消化下来的细胞悬液，再稀释成相应的细胞浓度，在不同孔径大小的细胞板中进行铺板，在37℃，5% CO2的细胞培养箱中孵育24h至细胞完全贴壁；步骤三、向不同的孔中加入不同浓度的油酸（Oleic acid ，OA）进行诱导，在37℃，5% CO2的细胞培养箱中孵育24h，完成诱导；步骤四、将诱导成功的脂肪细胞，进行油红O染色，在显微镜下观察。
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