[发明专利]人HLA-F单克隆抗体及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种人HLA‑F单克隆抗体及其制备方法，将合成基因HLA‑F连入载体pCzn1(+)，获得重组质粒转入表达菌株，得到具有氨苄西林抗性的单克隆菌株利用IPTG进行诱导表达，得到目标蛋白HLA‑F包涵体依次进行变复性处理、Ni柱纯化处理，得到纯化后HLA‑F蛋白对小鼠进行快速免疫，再利用免疫小鼠的淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，之后筛选出阳性孔细胞并进行亚克隆，得到强阳性细胞株进行腹水制备，纯化处理腹水后，得到所述人HLA‑F单克隆抗体，不仅适用于蛋白免疫印记、ELISA，而且适用于免疫共沉淀、免疫荧光及中和抗体。可阻断肿瘤细胞对NK细胞免疫功能的抑制作用，激活NK细胞靶向杀伤肿瘤细胞。

主权项

1.人HLA‑F单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将基因HLA‑F连入载体pCzn1(+)，获得重组质粒pCzn1(+)‑HLA‑F；(2)将质粒pCzn1(+)‑HLA‑F转入表达菌株，得到具有氨苄西林抗性的单克隆菌株；之后采用IPTG进行诱导表达，得到目标蛋白HLA‑F包涵体；(3)对步骤(2)所述目标蛋白HLA‑F包涵体依次进行变复性处理、Ni柱纯化处理，得到纯化后HLA‑F蛋白；(4)利用步骤(3)所述纯化后HLA‑F蛋白对小鼠进行快速免疫，得到免疫小鼠，利用免疫小鼠的淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，之后筛选出阳性孔细胞并进行亚克隆；(5)筛选经步骤(4)亚克隆后得到的强阳性细胞株进行腹水制备，对腹水进行纯化处理后，即得所述人HLA‑F单克隆抗体。