[发明专利]一种同时表达HA和HEF的复制缺陷型重组流感病毒

摘要

本发明提供一种复制缺陷型A、D二价流感病毒弱毒活疫苗制备方法。本发明构建了一种重组病毒株，在没有改变基因稳定性前体下，构建的重组病毒可稳定的同时表达A型流感病毒H1N1亚型的表面蛋白血凝素HA和D型流感病毒唯一的表面蛋白血凝素酯酶融合蛋白HEF。所构建的弱毒株不仅具有良好的基因稳定性而且在实验动物体内不能复制，所以并不具备致病性，同时还可诱导机体产生很强的粘膜免疫应答和细胞免疫应答水平，保持强烈且持久的免疫原性。最关键的是，该疫苗侯选株可对A型流感病毒H1N1亚型和D型流感病毒均可产生免疫保护作用。那么对于A型和D型流感的预防与控制具有巨大的社会意义。

主权项

1.一种复制缺陷型重组流感病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下的步骤：1)合成包含有D型流感病毒表面糖蛋白‑血凝素酯酶融合蛋白HEF的开放阅读框、A型H1N1流感病毒NA片段3′端非编码区的202个核苷酸和5′端非编码区的185个核苷酸的DNA片段，将合成的DNA片段连接到载体质粒pHW2000上，构建成重组质粒pHW‑NA‑HEF；2)将步骤1)构建的重组质粒pHW‑NA‑HEF与用于表达A型流感病毒亚型H1N1的PB2、PB1、PA、HA、NP、M、NS七个基因序列的质粒共同转染到293T细胞和稳定表达流感病毒H1N1亚型神经氨酸酶NA的MDCK细胞。；3)收集转染后293T细胞和改造后MDCK细胞的上清培养液；4)在稳定表达A型流感病毒H1N1亚型神经氨酸酶NA的MDCK细胞系上扩增拯救出的重组流感病毒CA09‑HEF。