[发明专利]一种基于花药培养的红掌脱毒方法

摘要

本发明提供了一种基于花药培养的红掌脱毒方法，该脱毒方法详细步骤包括：（1）红掌花序的取材与预处理；（2）无菌花药的获得与接种；（3）花药诱导培养；（4）愈伤组织分化培养（5）壮苗生根培养；（6）炼苗与移栽；（7）红掌单倍体植株的剔除。本发明的脱毒原理是通过花药培养途径获得了红掌花粉植株，花粉植株几乎不含病毒，再剔除花培群体中的单倍体杂株，从而获得脱毒的红掌正常倍性植株。本发明操作简便，生产技术要求低，脱毒效率高，经检测脱毒率几乎可达100%，能够满足红掌脱毒苗规模化生产的需要。

主权项

1.一种基于花药培养的红掌脱毒方法，其特征在于，该脱毒方法的详细步骤如下：（1）红掌花序的取材与预处理在10月~11月的晴天上午或阴天早上露水干后取材，将摘得的花序用湿纱布包裹带回实验室，筛选花粉小孢子处于单核中晚期的花序，置于4℃低温预处理3~5d；（2）无菌花药的获得与接种将上述花序用自来水冲洗10~20min，在超净工作台无菌条件下，先用75%酒精浸泡10min，再用无菌水冲洗干净，然后用无菌滤纸吸干表面水分；于解剖镜下用镊子拨开花序取出花药投入0.5%次氯酸钠+2‑3滴吐温‑80的消毒液中浸泡5~8min，再用无菌水冲洗3~4次后，即获得无菌花药；将无菌花药接种在诱导培养基中，每瓶培养基接种40‑50枚花药；（3）花药诱导培养将接种了花药的诱导培养基放置于人工气候培养箱中培养，培养条件控制为温度24~26℃，相对湿度65~75％，光照强度1500~2000Lux，光照10h/d，培养45~55d可诱导出黄绿色较致密的愈伤组织；（4）愈伤组织分化培养无菌条件下将诱导成功的直径为1.0‑2.0cm的愈伤组织转接到分化培养基上，置于24~26℃、相对湿度65~75％、光照强度2000~2500Lux、光照10~12h/d的培养条件下进行愈伤组织分化培养，培养38~45d后愈伤组织分化出不定芽；（5）壮苗生根培养筛选步骤（4）中分化出的不定芽，将高于1.5cm的小芽从愈伤组织上切下，接种到生根培养基上，置于温度22~25℃、相对湿度60~80％、光照强度2000~3000Lux、光照12~14h/d的培养条件下进行壮苗生根培养，每30~33d继代一次，继代3次后可得到长出2‑3片幼叶、根系生长旺盛的红掌幼苗；（6）炼苗与移栽将装有红掌幼苗的组培瓶移到温室中，此时温度控制在20~27℃、湿度控制在75％~85％，将组培瓶的瓶口打开，在自然光光照的条件下炼苗7~9d，然后将幼苗从组培瓶中取出，清洗掉根部的培养基残留，移栽入温室的栽培基质中，常规栽培管理；（7）红掌单倍体植株的剔除移栽后的红掌幼苗生长到现蕾期时，将单倍体植株剔除，剩余的则为红掌正常倍性的植株。