[发明专利]一种毫米波培养基制备九质纳豆激酶的方法

摘要

本发明公开了一种毫米波培养基制备九质纳豆激酶的方法。该方法属于生物技术领域，解决了现有技术中纳豆激酶发酵过程中微生物细胞活性低、纳豆激酶代谢产量低和生产稳定性差以及无法适应不同人体需求的问题。本发明包括以下步骤：毫米波照射制备芽孢杆菌株、毫米波照射制备九种培养基以及发酵种子后进行发酵，发酵液进行干燥。本发明根据九种不同体质制备不同配方的毫米波照射发酵培养基，毫米波可以快速有效的作用于微生物体内细胞，可令培养基生物转化效率、纳豆激酶产量与活性均能得到明显提高，九种配方可以满足九种不同体质人群对营养健康需求，整个发酵过程在特定频率的毫米波环境下进行，利用毫米波的非热效应，提升丝氨酸酶的含量和活性。

主权项

1.一种毫米波培养基制备九质纳豆激酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)在封闭环境中，将不同品种的纳豆放置于不同锥形瓶中，并添加无菌水至30mL，双折射光子晶体光纤微波毫米波发生器通过毫米波波导管引出频率为53～60GHz的毫米波，波导管口持续对准纳豆，锥形瓶放入37℃摇床中振摇30min，取出后水浴沸煮5min，冷却后稀释涂布LB固体培养基，37℃培养过夜，挑取经培养后LB平板培养基上的单菌落点于酪蛋白初筛平板，37℃培养过夜，选取透明圈直径与菌落直径比大者转接至LB液体培养基中，得纳豆芽孢杆菌株；(2)按照以下质量的成分称取各组分，并根据适用体质类别分为九组，即按以下配方制备：A组(阳虚体质)：芸豆粉12～30g/L、绿豆粉4～10g/L、桑叶粉1～3g/L、麦苗粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；B组(阴虚体质)：芸豆粉12～30g/L、赤豆粉4～8g/L、苦瓜粉1～3g/L、西红柿粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；C组(气虚体质)：芸豆粉12～30g/L、糯米粉1～3g/L、银杏粉1～3g/L、红薯粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；D组(痰湿体质)：芸豆粉12～30g/L、莲藕粉1～3g/L、冬枣粉1～3g/L、青稞粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；E组(湿热体质)：芸豆粉12～30g/L、绿豆粉1～3g/L、冬瓜粉1～3g/L、秦皮粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；F组(气郁体质)：芸豆粉12～30g/L、海带粉1～3g/L、海藻粉1～3g/L、山楂粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；G组(血瘀体质)：芸豆粉12～30g/L、金橘粉1～3g/L、玫瑰花1～3g/L、绿茶粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；H组(特禀体质)：芸豆粉12～30g/L、甘草1～3g/L、黄芪1～3g/L、五味子1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L；I组(平和体质)：芸豆粉12～30g/L、黑豆粉1～3g/L、红豆粉1～3g/L、玉米粉1～3g/L、葡萄糖30～40g/L以及氯化钠0.05～4g/L，将各组混合物经高温灭菌后加入无菌发酵罐内，再加入适量纯化水，双折射光子晶体光纤微波毫米波发生器输出频率为53～60GHz的毫米波，在毫米波的持续稳定照射下，以100r/min的速度搅拌12h，即得生产纳豆激酶的毫米波照射培养基；(3)纳豆芽孢杆菌株被接种于毫米波照射培养基中，于36～37℃，频率为53～60GHz的毫米波持续稳定照射的振荡器摇瓶中，100～120r/min振荡培养8～12h，制得发酵种子；(4)按3～10％的接种比，将发酵种子投入步骤(2)中无菌发酵罐内，在罐内压力为0.1MPa，每公斤发酵液的空气输入量为0.1m3/min，毫米波频率为53～60GHz的环境下，以100r/min的速度搅拌一段时间后，持续发酵培养24h；(5)持续发酵过程中，每两个小时对发酵液进行取样，测定丝氨酸酶活性值，当酶活性值达到20000U/mL时，调节双折射光子晶体光纤微波毫米波发生器，输出频率为80GHz，在不影响细胞特性的情况下，令发酵停止；(6)发酵停止后，在24h以内进行干燥处理。