[发明专利]HBV转基因小鼠原代肝细胞的分离、培养与鉴定的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种HBV转基因小鼠原代肝细胞的分离、培养与鉴定的方法。所述方法为改良的胶原酶两步灌流法进行原代肝细胞的分离和收集；用无菌的细胞过滤器将收集的肝细胞进行过滤，再经离心后加培养基重悬，细胞计数后接种培养；鉴定包括小鼠原代肝细胞白蛋白检测、小鼠原代肝细胞糖原检测和小鼠原代肝细胞中HBV的表达分析。本发明获取的HBV转基因小鼠原代肝细胞细胞活率高，具有正常的肝实质细胞功能，并可维持8天，可以更加真实反应其HBV感染状态下的肝细胞生理代谢活动，这对体外研究肝细胞生理代谢功能以及抗病毒药物研究具有重要意义。

主权项

1.一种HBV转基因小鼠原代肝细胞的分离、培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)原代肝细胞的分离：无菌条件下将预热37℃的灌注液I注入肝门静脉，至肝脏膨起1‑2倍后扎破下腔静脉，放血待肝脏回缩到原来大小，继续注入注灌注液I 5～12min后，更换为预热37℃的灌注液II，当小鼠肝脏变软变白轻压有明显凹陷停止灌注并将小鼠肝脏解剖游离，将肝脏的被膜破裂收集处理后的肝细胞；2)肝细胞的纯化：用无菌的细胞过滤器将步骤1)收集的肝细胞进行过滤，再经离心后加培养基重悬，细胞计数后接种培养。