[发明专利]一种细菌生物膜胞外DNA提取方法在审
| 申请号： | 201811003186.0 | 申请日： | 2018-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN109022421A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 蔡鹏;彭娜;高春辉;吴一超;黄巧云 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12R1/125;C12R1/40 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 徐绍新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种细菌生物膜胞外DNA提取方法，该方法首先采用纤维素酶联合蛋白酶K对细菌生物膜进行酶解处理，然后通过微滤、离心、沉淀等步骤，能够将大部分结合态eDNA从生物膜中分离出来，从而提高了胞外DNA的提取产量，同时还能降低生物膜中细菌的死亡率，从而减少细胞裂解对产物造成的影响。 | ||
| 搜索关键词： | 细菌生物膜 生物膜 酶解处理 细胞裂解 纤维素酶 蛋白酶K 结合态 微滤 沉淀 死亡率 细菌 联合 | ||
【主权项】：
1.一种细菌生物膜胞外DNA提取方法，其特征在于包括以下步骤：1)取生物膜样品，配制成OD600为1～3的细胞悬液，然后加入5～20μg/ml纤维素酶，35～40℃孵育10～60min，再加入2～10μg/ml蛋白酶K，35～40℃孵育30～120min；2)将酶解后的细胞悬液用0.1～0.5μm滤膜过滤，收集滤液，1～5℃离心，取上清；3)在上清中加入0.05～0.3倍体积的1～5mol/L乙酸钠溶液与1～5倍体积的无水乙醇，‑30～‑10℃过夜后再次离心，将沉淀物用无水乙醇洗涤，烘干，即得。
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