[发明专利]利用CRISPR-Cas9构建的斑马鱼cip2a基因突变体及其构建方法在审
| 申请号： | 201811032925.9 | 申请日： | 2018-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN109082426A | 公开（公告）日： | 2018-12-25 |
| 发明（设计）人： | 吴怡;方芳;李之珩;钱光辉 | 申请（专利权）人： | 苏州大学附属儿童医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12Q1/6858;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙) 11277 | 代理人： | 刘新宇;李茂家 |
| 地址： | 215000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用CRISPR‑Cas9构建斑马鱼cip2a基因突变体以及使用该方法构建的斑马鱼cip2a基因突变体。其中包括了cip2a基因座上Cas9‑gRNA靶位点的设计，Cas9mRNA和cip2a‑gRNA的合成，以及体内显微注射和后续遗传筛选。该靶位点的序列位于cip2a基因第二个外显子上；同时设计一对包含靶位点的引物，通过PCR进行靶位点突变的验证。该验证方式同样适用于后续遗传筛选。本发明所述的利用CRISPR‑Cas9技术构建的cip2a斑马鱼突变体表现出高突变率，且突变造成了Cip2a蛋白翻译的提前终止。此外，本发明所述的cip2a基因突变斑马鱼仅通过连续的两代筛选就得到了。本发明获得了2种突变类型的cip2a突变体斑马鱼系。 | ||
| 搜索关键词： | 斑马鱼 靶位点 构建 基因突变体 突变 筛选 遗传 生物技术领域 基因突变 技术构建 突变类型 突变体表 显微注射 验证方式 基因座 突变体 外显子 引物 合成 体内 验证 翻译 基因 | ||
【主权项】：
1.一种利用CRISPR‑Cas9技术构建斑马鱼cip2a基因突变体的方法，其特征在于，所述突变体构建包括如下步骤：(1)在cip2a基因上选择Cas9靶位点；(2)分析确认cip2a‑Cas9靶位点；(3)制备Cas9mRNA和cip2a‑gRNA；(4)制备F0斑马鱼并检测cip2a基因靶点突变效率；(5)检测F0斑马鱼的生殖遗传；(6)确认F1斑马鱼cip2a基因突变类型；(7)筛选F2斑马鱼cip2a基因纯合突变体。
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