[发明专利]一种酵母功能微球的制备方法及其在免疫分析中的应用

摘要

本发明属于生物材料制备领域，涉及一种酵母功能微球的制备方法及其在免疫分析中的应用。通过处理酵母细胞，制备高分散性功能微球，将金纳米颗粒快速自组装在处理后的酵母表面，用于免疫分析。本发明的要点在于，收集适当培养的酵母细胞，洗涤离心和甲醛处理后，用Decoating处理液处理，得到处理后的酵母微球，用处理后的酵母微球负载金纳米颗粒。本发明制备的功能微球机械刚性结构更加稳定，可快速负载金纳米颗粒且不易脱落，作为载体的性能更加稳定可靠，利用处理后的酵母微球负载胶体金后制备的等离子体金微球，可以显著提高在免疫分析中的灵敏度。本发明还公开了制备的酵母微球在动物免疫生物检材中的应用。

主权项

1.一种利用酵母菌制备功能微球的方法，其特征包括下列步骤：(1)配制YPD液体培养基，灭菌后用该培养基活化酵母菌6‑8h，连续活化两次，当OD600值为0.3‑0.9时，按1％体积的量接种后进行扩大培养，然后在28℃，200rpm的恒温摇床中培养，培养至10h时，取样并在显微镜下观察，此后，每隔半小时取样观察一次，培养12h后在显微镜下观察到的酵母细胞形态大小一致时，立即离心收集酵母细胞，并用去离子水洗涤并离心，重复3‑5次；(2)用10％浓度的甲醛溶液将酵母细胞重悬，4℃放置6h，离心去除甲醛溶液，用去离子水洗涤或离心，重复3次；然后用30mL去离子水重悬湿重为1g的酵母菌菌体，调整超声波细胞破碎仪的输出功率至220W～450W，振幅为0％‑80％，超声处理5‑30min，超声处理为间歇操作，即在冰浴中超声3s停3s；(3)将上步处理的酵母用去离子水离心和洗涤，重复3次；(4)按每1g湿重的酵母菌菌体配制30mL去除缓冲液(Decoating Buffer)的要求配置去除缓冲液并将酵母重悬，在37～80℃水浴中搅拌处理0.5‑2h，将处理后的酵母用去离子水离心和洗涤，重复6‑10次，最后用适量的去离子水重悬，得到酵母微球；(5)将制备好的胶体金纳米颗粒与制备好的浓度范围为106‑108个/mL的酵母悬液混合后于120～140rpm，37℃，恒温摇床中振荡孵育5‑60min，使胶体金颗粒均匀吸附在酵母表面，形成酵母@胶体金的复合微球，然后用去离子水反复离心洗涤3次，去除未吸附的胶体金纳米颗粒。