[发明专利]一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法

摘要

本发明公开了一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法，其特征是，包括如下步骤：（1）制备已知浓度的葡萄糖标准溶液体系，测定其380nm处的荧光峰强度值为F；（2）制备空白对照溶液体系，亦测定其荧光峰强度值为F₀；（3）计算ΔF=F‑F₀；（4）以ΔF对葡萄糖的浓度做工作曲线；（5）制备被测样品溶液，测定其荧光峰强度值为F_样品，计算ΔF_样品=F_样品‑F₀；（6）依据工作曲线，计算出被测样品中的葡萄糖的浓度。这种方法采用酶催化氧化TMB生成具有荧光的产物，且以反应产物为荧光分子探针使得荧光峰强度与被测物的浓度呈线性关系，实现对目标物的定量测定，方法简便、选择性好、灵敏度高。

主权项

1.一种用酶催化氧化TMB荧光光谱测定葡萄糖的方法，其特征是，包括如下步骤：(1)制备已知浓度的葡萄糖标准溶液体系：于不同的刻度试管中，依次加入1μL‑40μL 500μmol/L葡萄糖标准溶液、10μL‑50μL 0.11mg/mL葡萄糖氧化酶溶液、100μL‑200μL 0.02mol/L pH 7.4PBS缓冲溶液和50μL‑150μL 0.5mmol/L TMB溶液，摇匀、于40℃水浴反应20min，冰水终止反应，用二次蒸馏水定容至1.5mL；(2)制备空白对照溶液体系：采用步骤(1)的方法不加葡萄糖标准溶液制备空白对照溶液体系；(3)分别取按步骤(1)、(2)制备的葡萄糖标准溶液体系及空白对照溶液体系倾入石英比色皿中，在荧光光谱仪上，设定仪器参数以280nm为激发波长扫描获得体系的荧光光谱，测定380nm处的荧光强度值为F，同时测定空白对照溶液体系的荧光强度值为F0，计算ΔF＝F‑F0；(4)依据ΔF对葡萄糖的浓度关系做工作曲线；(5)依照步骤(1)的方法制备样品溶液，其中加入的葡萄糖标准溶液替换为样品溶液，并按步骤(3)的方法测定样品溶液的荧光峰强度值为F样品，计算ΔF样品＝F样品‑F0；(6)依据步骤(4)的工作曲线，计算出样品溶液葡萄糖的含量。