[发明专利]一种用纤维素酶原位修饰金芯片的方法

摘要

本发明涉及纤维素酶原位修饰金芯片的方法。石英晶体微天平(QCM)和表面等离子体共振仪(SPR)技术是实时、原位研究生物大分子在固体界面的吸附是重要工具，前者同时检测石英晶体频率的变化(对应感应器上的重量)和吸附层的能量耗散值(对应感应器上薄膜的结构)的变化，后者只研究“干物质”的变化。传统的研究纤维素酶与底物的方法是把底物固定在QCM或SPR芯片上，然后把纤维素酶作为流动相通过，以研究二者的相互作用。本发明运用原位修饰的方法，把纤维素酶结合到金芯片上，构筑了表面均匀的纤维素酶薄膜，拓宽QCM或SPR的应用范围来研究纤维素酶与体系中其他高分子的相互作用。

主权项

1.一种纤维素酶原位修饰金芯片的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤(1)：所用芯片为金表面的QCM或SPR芯片，实验前将金芯片清洗后用氮气吹干，然后放入紫外‑臭氧清洗机照射10‑30min；步骤(2)：用75％乙醇为溶剂配制40mM的11‑巯基十一烷酸(MUA)与3‑巯基丙酸(MPA)；步骤(3)：用pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液配制2mM的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和5mM的N‑羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐(NHSS)的溶液，和50μg/ml的纤维素酶液体；步骤(4)：将步骤(1)清洗并照射后的芯片放置在QCM或SPR流动池内；步骤(5)：首先以0.1ml/min的流速通入75％的乙醇溶液把基线走平；步骤(6)：待平稳后，把步骤(2)中配制的MPA和MUA溶液按体积比10∶1的比例混合后，以0.1ml/min的流速通入QCM或SPR流动池，待检测信号平衡后通入75％乙醇冲洗；步骤(7)：接下来把步骤(3)中配制的EDC和NHSS溶液以体积比1∶1混合，然后以0.1ml/min的流速通入系统，15min后停止通液体；步骤(8)：一小时后重新启动泵，以0.1ml/min的流速通入pH为7.4的0.05mM的磷酸盐缓冲溶液；步骤(9)：待信号平稳后以0.1ml/min的流速通入步骤(3)配制的纤维素酶液体，纤维素酶吸附到芯片上，待吸附平衡后通入磷酸盐缓冲溶液冲洗去未牢固结合的纤维素酶，最后得到原位纤维素酶修饰的金芯片。