[发明专利]基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP53检测方法

摘要

本发明公开了基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP 53检测方法，包括以下步骤：1)制备含金纳米颗粒的金胶；2)用DNA探针修饰金纳米颗粒；3)将颈环DNA、TP 53混合于缓冲液，加入核酸外切酶III，制得反应溶液；4)DNA探针修饰的金胶溶液混合，并加入氯化锌继续反应；5)进行荧光信号的测量。本发明通过核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略，将待测物质TP 53浓度的检测限大大降低。本发明用于检测TP 53具有灵敏度高、快速、成本低的特点，检测限为21fM，通过设计的核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略和荧光光谱技术的结合，可以实现TP 53生物传感的应用。

主权项

1.一种基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP 53检测方法，其特征在于，该方法先设计颈环DNA以及荧光染料标记的DNA探针；然后将DNA探针修饰至金纳米颗粒表面，荧光染料由于靠近金纳米颗粒其荧光发生猝灭；待检基因TP 53存在时，TP 53与颈环DNA互补配对，通过外切酶III切割颈环DNA，TP 53以及被切割的颈环DNA被释放并与未被切割的颈环DNA继续结合进入下一循环；被切割的颈环DNA暴露出核酶序列，与金纳米颗粒表面上的DNA探针结合而后发挥核酶的活性对DNA探针切割，荧光染料会远离金纳米颗粒，其荧光恢复；最后进行荧光测量实现TP 53的检测。