[发明专利]高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法在审
| 申请号： | 201811078847.6 | 申请日： | 2018-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN109142197A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 徐艇 | 申请（专利权）人： | 江苏瑞明生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N15/10 | 分类号： | G01N15/10;G01N33/50 |
| 代理公司： | 上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙) 31258 | 代理人： | 任益;闫玉芳 |
| 地址： | 214200 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效准确检测乳腺细胞癌变的检测方法，包括步骤1，试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液；步骤2，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度；步骤3，用PBS缓冲液冲洗粘附在盖玻片上的细胞3次；步骤4，将细胞浴槽放入纳米光电生化检测仪记录细胞内DCF（特异性荧光染料）的荧光光子数响应。本发明实时检测揭示了在癌细胞中比正常细胞有明显更高的氧化响应，为在纳米级的环境中探测化学动力学以阐明关键生物过程提供了一个独特的应用方向。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 乳腺细胞 细胞悬液 癌变 特异性荧光染料 超灵敏检测 生化检测仪 生物过程 实时检测 探测化学 应用方向 荧光光子 正常细胞 准确检测 动力学 吹打 响应 盖玻片 计数板 纳米级 细胞株 检测 癌细胞 放入 浴槽 粘附 冲洗 消化 试验 记录 | ||
【主权项】：
1.一种高效准确超灵敏检测乳腺细胞癌变的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，选择人乳腺上皮细胞株（MCF10A）、人乳腺癌细胞株（MCF7）、HER2过表达的MCF7细胞株（MCF7/HER2）作为试验用细胞株，并对试验用细胞株进行消化吹打处理形成细胞悬液；步骤2，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度，以细胞密度为1×104个细胞/cm2接种到细胞浴槽的盖玻片上用于细胞附着；步骤3，细胞分别附着24h、24.5h、25h、25.5h后，用PBS缓冲液冲洗粘附在盖玻片上的细胞3次，在37℃ 用染料DCFH‑DA染色细胞30分钟，孵育后，将染色的细胞用PBS缓冲液冲洗三次后向细胞浴槽中加入100μl的PBS缓冲液；步骤4，将细胞浴槽放入纳米光电生化检测仪，调整纳米探头与细胞的相对位置，检测过程中添加刺激物PMA并同时记录细胞内DCF的荧光光子数响应。
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