[发明专利]禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺在审
| 申请号： | 201811083057.7 | 申请日： | 2018-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN109161575A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 张改平;刘运超;邓瑞广;邢广旭;陈玉梅;刘东民;魏蔷;冯华;周景明;刘艳凯;赵孟孟 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院;河南中泽生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/08;C12R1/19 |
| 代理公司： | 河南科技通律师事务所 41123 | 代理人： | 张晓辉;樊羿 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，旨在解决工程菌禽法氏囊病毒VP2蛋白表达量低的技术问题。该发酵工艺包括以下步骤：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段：制备基础培养基置于发酵罐中，将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，待溶氧量急剧上升开始补料；II.蛋白表达阶段：加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；加入补料培养基之二，继续发酵至结束即成。本发明的工艺方法蛋白表达量高，能够缩短生产周期、减少设备投资，降低生产成本，提高生产效率，能够极大地提高产品在商场上的竞争力，为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制和生产奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 法氏囊病毒 发酵 发酵工艺 高表达 基因工程亚单位疫苗 补料分批发酵 缩短生产周期 补料培养基 蛋白表达量 二级种子液 基础培养基 蛋白表达 减少设备 菌种活化 快速繁殖 生产效率 种子培养 表达量 工程菌 接种量 溶氧量 诱导剂 补料 制备 细胞 投资 生产 | ||
【主权项】：
1.一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，包括以下步骤：（1）菌种活化：将含有禽法氏囊病毒VP2蛋白基因的基因工程菌菌种划线接种在含有卡那霉素的LB固体培养基表面，于37℃培养8～16h；（2）种子培养：将活化后的菌种接种一级种子培养基中，37℃振荡培养8～10～12h，得一级种子液；再将一级种子液按1～2%的接种量接入二级种子培养基中，37℃振荡培养4～6h，得二级种子液；（3）补料分批发酵：I. 细胞快速繁殖阶段a. 制备基础培养基置于发酵罐中，初始pH 6.54，121℃灭菌20min，降温至35℃，调节pH为6.8～7.2，再将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，控制发酵温度为35～37℃，溶氧量维持在20～30%；b. 待基础培养基营养物质耗尽时，以0.3～3L/h的速率加入补料培养基之一；II. 蛋白表达阶段：a. 待发酵液的OD600达到75～85，将发酵液温度降至30℃，加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；b. 溶氧量维持在20～30%；以0.3～3L/h的速率加入补料培养基之二；工程菌的比生长速率为0.01～0.1；继续发酵至结束即成。
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