[发明专利]一种针对非洲猪瘟病毒的核酸快速检测方法

摘要

本发明公开了一种针对非洲猪瘟病毒的核酸快速检测方法，包括如下检测方法：材料准备，引物稀释，扩增反应，扩增曲线和溶解曲线获得，判定；本发明的有益效果是：高特异性：6条引物对应目标序列8个特异区域的识别保证了检测反应的高度特异性；高灵敏度：检测反应的灵敏度高，可检测到10个拷贝；操作简单：只要将待测样本、设计的特异引物和反应液混合，上机扩增30分钟即可得到检测结果；使用一个反应管即可检测出样本是否感染了非洲猪瘟病毒，填补了非洲猪瘟核酸快速检测方法的空缺；试剂盒可用于多个检测平台上，不仅可以用在基因快速检测仪和定量PCR仪，也可以用在其他可以提供恒定温度的设备上如金属浴等。

主权项

1.一种针对非洲猪瘟病毒的核酸快速检测方法，其特征在于，包括如下检测方法：步骤一：材料准备：检测猪是否感染非洲猪瘟的快速扩增引物组，引物组包括：引物1和2干粉、引物3和4干粉、引物5和6干粉，各1OD；反应液组成：反应浓缩液(DNA聚合酶，Buffer，dNTP，MgSO4，Betain，荧光染料)；构建完成的非洲猪瘟病毒pUC‑ASF质粒样本；阴性对照组：不含目的基因反应液；步骤二：引物稀释：将试剂盒中引物1和2稀释成40uM,引物3和4稀释成5uM,引物5和6稀释成20uM；步骤三：扩增反应：反应浓缩液15ul、引物组6ul,模本、构建的标准质粒DNA1ul，无菌无核酸酶水3ul；步骤四：扩增曲线和溶解曲线获得：将步骤三中的反应液混匀，放入定量PCR仪，设置60个循环，循环完成后获得扩增曲线和溶解曲线；或者基因快速检测系统中，65℃、30分钟，获得扩增曲线和溶解曲线；步骤五：判定：根据步骤四所获得扩增曲线和溶解曲线进行判定。