[发明专利]一种拮抗桉树青枯病的芽孢杆菌的筛选方法

摘要

本发明公开了一种拮抗桉树青枯病的芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：备选芽胞杆菌分离培养准备,对土壤芽孢杆菌分离纯化培养，或已经获得了分离纯化芽孢杆菌菌株；桉树青枯病原菌的培养及菌培养液的制备；在桉树青枯病菌株培养液基础上加入刃天青盐指示剂，加入各种待测芽孢杆菌样品以建立桉树青枯病病菌混合培养体系；并进行培养12小时；对培养后的桉树青枯病混合培养体系的图像进行颜色特征R值提取；通过对照组和处理组的分析比较以确定测试菌株拮抗桉树青枯病的能力以筛选高效拮抗的芽孢杆菌生防菌。本方法操作简便，无需要进行营养平板上进行桉树青枯病病原菌进行对峙培养，可以快速、高效地筛选出具有拮抗的桉树青枯病的芽孢杆菌。

主权项

1.一种拮抗桉树青枯病的芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)备选芽胞杆菌分离培养准备称取土壤样品配成10‑1g/mL浓度，作为土壤悬液原液；土壤悬液稀释为10‑4‑10‑5g/mL浓度梯度，置于100℃水浴中3～5分钟后,灭活营养细胞,保留芽孢，配置好芽胞杆菌分离培养基，倒平板,凝固后静置1h，采用稀释平板涂布法吸取土壤悬液涂布到芽孢杆菌培养平板，放入恒温箱中培养24h；(2)桉树青枯病原菌的培养及培养液的制备以取样环取一环已纯化的桉树青枯病菌株，划线于CPG培养基中，培养后取流动性强的菌株扩大培养36‑48h后，无菌水洗下菌体，离心，去除上清液，含有无菌水梯度稀释后平板计数，然后用稀释100倍的无菌培养液配成配成108cfu·mL‑1培养液保存备用；(3)桉树青枯病病菌混合培养体系建立所述的桉树青枯病病菌混合培养体系为108cfu·mL‑1的青枯病病原菌培养液，加入0.01％刃天青盐溶液，加入不同测试来源的芽孢杆菌菌液制备得到；所述青枯病病原菌培养液、刃天青盐溶液、芽孢杆菌菌液的体积比为20:1:1；(4)桉树青枯病病菌混合培养：充分摇匀桉树青枯病病菌混合培养体系，恒温培养12h；(5)桉树青枯病病菌混合培养体系图像颜色特征提取观察培养液的颜色：将不同的处理组培养管按照组平放至白色背景下，使光照均匀，使用图像设备获取图像参数，利用是图像软件提取每个处理组合的培养溶液中典型颜色的RGB特征的R值；(6)拮抗桉树青枯病的芽孢杆菌的筛选筛选桉树青枯病病菌混合培养体系图像颜色特征提取颜色特征的R值，通过对照比较统计分析确定处理组是否存在着差异。